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药物成瘾是长期滥用药物造成的,已成为全球关心的医学和社会问题,对药物的精神依赖至今尚无理想的治疗方法,本研究立足于近日基因period1(per1)和药物成瘾的关系,采用脱氧核酶阻断per1基因的表达,深入探讨per1基因对药物成瘾影响作用,进而寻求解决药物成瘾的基因疗法。
针对period1(per1)RNA组分模板区设计合成10-23型脱氧核酶DRz164、DRz256,构建peDNA3.1(+)-per1164:256体外转录质粒,T7/SP6体外转录后,转录产物和DRz164或DRz256在一定的条件下行体外切割反应,用地高辛核酸检测试剂盒检测脱氧核酶对per1mRNA组分的体外切割效率。脂质体介导法,pcDNA3-per1和DRz分别导入NIH3T3细胞,逆转录聚合酶链反应和流式细胞术检测NIH3T3细胞per1表达。
预先小鼠脑室注射DRz164,建立吗啡成瘾(慢性依赖)动物模型,通过条件位置偏爱实验观察DRz164对吗啡奖赏效应的影响。最后一次吗啡(盐水)注射后每隔4h提取脑组织蛋白,westernblot检测Per1蛋白变化,观察DRz164对Per1蛋白的影响。最后一次吗啡(盐水)注射后提取脑组织蛋白,westernblot检测c-Fos蛋白、p42/44MAPK、P-p42/44MAPK以及P-SAPK/JNK变化,探讨相关信号转导通路的变化。
人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞RA(10μM)分化一周,预先转染DRz164,50%马血清诱导2h后换无血清培养液并加入吗啡(10μM),按时间检测per1表达、cAMP的变化,并比较P-p42/44MAPK的变化。