【摘 要】
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目的：构建骨形态发生蛋白4(BMP4)慢病毒载体,检测其对鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性和成牙潜能的影响,探讨牙胚细胞及骨形态发生蛋白4转染的骨髓间充质干细胞的相互间的
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目的：构建骨形态发生蛋白4(BMP4)慢病毒载体,检测其对鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性和成牙潜能的影响,探讨牙胚细胞及骨形态发生蛋白4转染的骨髓间充质干细胞的相互间的成牙诱导作用,以期为组织工程牙筛选种子细胞。方法：从成熟人胎盘组织提取RNA后,RT-PCR扩增BMP4基因,连接至plenti6/v5-D-TOPO表达载体,构建出BMP4-plenti6/v5-D-TOPO重组慢病毒表达载体；转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,用MTT法检测转染前后细胞的增殖活性,并将骨髓间充质干细胞和BMP4转染的骨髓间充质干细胞分别与SD大鼠牙胚细胞按1：1比例混合培养,同时将细胞分为五组,BMSCs组、BMP4/BMSCs组、牙胚细胞组、BMSCs/牙胚细胞组(混合组1)、BMP4/BMSCs/牙胚细胞组(混合组2),分别采用实时荧光定量PCR和Western-blotting检测五组细胞Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1成牙相关基因mRNA水平和蛋白水平相对表达量的变化。结果：(1)BMP4基因转染骨髓间充质干细胞后,细胞体外增殖活性增强,(2) BMSCs组和BMP4/BMSCs组相比,BMP4/BMSCs组成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1mRNA水平和蛋白水平表达量增多,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平差异无显著性意义(P>0.05)。(3)混合组1和混合组2相比,混合组2Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白(AMBN)、牙本质基质蛋白1(DMP1)、同源异型盒基因1 (Dlxl)mRNA水平和蛋白水平表达量增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：BMP4可提高骨髓间充质干细胞体外增殖活性和牙向分化能力,牙胚细胞与BMP4转染的骨髓间充质干细胞共培养,促进了成牙相关基因的表达,可作为组织工程牙的备选种子细胞。
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