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目的:对熟地黄含药血清进行分析,探索熟地黄滋阴补血药效的物质基础。 方法:熟地黄药材HPLC色谱研究:采用高压蒸制的方法自制熟地黄,以乙腈-0.1%磷酸水溶液(1:99)为流动相,采用梯度洗脱,检测波长为259nm,柱温30℃,流速1mL·min-1,对5批次怀熟地黄进行HPLC分析测定,采用药典委员会指纹图谱相似度评价软件(2004A版)进行相似度评价,建立怀熟地黄药材HPLC色谱图。 熟地黄对阴虚血虚证的药效研究: 灌胃甲状腺素片复制“甲亢阴虚”大鼠模型,观察熟地黄对阴虚模型大鼠一般状态、体温、体重、血清中T3、T4和Cort的值以及肾上腺和甲状腺病理状态的影响。 环磷酰胺和乙酰苯肼联用的方法复制“贫血”大鼠模型,观察熟地黄对血虚模型大鼠外周血象和外在体征、以及脾脏和胸腺病理改变的影响。 熟地黄的血清研究:用高效液相法,对大鼠血清进行分析,比较熟地黄药材、含药血清、空白血清的高效液相色谱图,研究熟地黄在血中移行成分及熟地黄对大鼠血清中固有成分的影响,探索熟地黄滋阴和补血功效的物质基础。 结果: 建立了熟地黄HPLC色谱图:按第一部分2.5项下色谱条件,以5-羟甲基糠醛为参照峰,建立了怀熟地黄的HPLC色谱图,确定了7个共有峰。色谱条件稳定,方法可行。 熟地黄对阴虚证和血虚证的药效观察: 对阴虚大鼠模型的影响:与模型组比较,灌服熟地黄水煎液阴虚大鼠发热程度减轻,体重减轻有所改善;血清中T3、和Cort值降低,T4值升高(p<0.05);一定程度改善了模型大鼠的甲状腺和肾上腺病理改变,反映了熟地黄滋阴的传统功效。 对血虚大鼠的影响:与模型组比较,灌服熟地黄水煎液血虚大鼠贫血的一般症状体征有明显改善,外周血象恢复较快,脾脏及胸腺病变有所改善,反映了熟地黄良好的补血作用。 熟地黄含药血清的研究: 阴虚大鼠含药血清HPLC色谱分析:熟地黄含药血清中观察到的2、4号峰为熟地黄药材的血中移行成分。 血虚大鼠含药血清HPLC色谱分析:熟地黄含药血清中观察到的2号峰为熟地黄药材的血中移行成分,另观察到含药血清中尚有1、3号变化的色谱峰。 结论:熟地黄HPLC色谱图的建立,证实了熟地黄质量比较稳定,且色谱方法稳定、可行,为本研究进行熟地黄体外、体内化学成分的比较奠定了基础;熟地黄药效学实验,基本上体现了怀熟地黄滋阴和补血的传统药效;对熟地黄含药血清的研究,提示熟地黄滋阴药效的物质基础可能来源于血清中2、4号色谱峰等物质;熟地黄治疗血虚证的机制可能与血清中的1、3号色谱峰的调节作用有关,补血药效的物质基础来源于1、2、3号色谱峰及熟地黄多糖等物质。熟地黄水煎液可能通过这些变化的色谱峰及多糖等物质发挥作用,纠正动物的病理状态。