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背景:变应性鼻炎是世界上最常见的呼吸道疾病之一,表现为连续喷嚏、清水样涕、鼻塞及鼻痒等不适。全世界约有5亿人群正在经受变应性鼻炎的困扰,我国中心城市的变应性鼻炎患病率为8.7%-24.1%,并且有逐年增加的趋势。变应性鼻炎虽不危及生命,但会严重影响患者的生活质量和工作效率,并对学业、就业、情感及社会功能造成负面影响,由其所造成的巨大社会、经济负担也不容忽视。变应性鼻炎的特征是CD4~+T细胞亚群及其相关免疫介质的参与,包括特异性细胞因子和趋化因子。长期以来,变应性鼻炎被认为是辅助性T(T helper,Th)2细胞上调和Th1细胞的相对缺失。Th2反应启动以嗜酸粒细胞浸润为主的过敏性炎症反应,导致血管通透性增加、渗出以及炎性细胞增多、神经末梢兴奋性增加等病理变化。近年来,Th17和调节性T(Regulatory T,Treg)细胞的相继发现将现有的Th1/Th2平衡模式复杂化,并扩大了我们对变应性鼻炎发病机制的理解。近期,一种新型独立的Th细胞亚群-Th9亚群被确认,其特点为高表达IL-9。IL-9可以影响炎症和正常组织细胞,致使嗜酸、淋巴以及肥大细胞增多,并增强后者对外界致敏物质反应。各种T细胞亚群主要通过分泌特定的细胞因子来调节炎症反应,如Th1细胞分泌干扰素(Interferon,IFN)-γ,Th2细胞分泌白介素(Interleukin,IL)-4、IL-5、、IL-13,Th9细胞分泌IL-9以及Th17细胞分泌IL-17。据报道,Th9细胞参与了过敏性哮喘的发展,但它们对变应性鼻炎的影响尚不清楚。目的:鉴于IL-9在其他炎症性疾病中具有重要作用,并且在这些条件下使用IL-9中和抗体具有保护作用,我们推断IL-9或Th9细胞可能是引起变应性鼻炎的重要因素,经过IL-9中和抗体治疗可能对变应性鼻炎有效果。故此,我们首先检测变应性鼻炎小鼠模型中是否存在Th9细胞亚群,然后来研究在给予IL-9中和抗体干预后,变应性鼻炎鼠模型中CD4~+T细胞亚群变化情况以及症状改善情况。方法:选取周龄为6-8周的雌性小鼠40只,分四组,平均每组10只;分别为正常对照组,变应性鼻炎组,IL-9中和抗体组以及同型对照组。在第0,2,4,6,8,10,12,14天,腹腔注射1 mg/ml卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)和20 mg/ml氢氧化铝100μl对小鼠进行致敏。第15天到第25天,每天用100μg OVA溶入20μl生理盐水中滴入小鼠鼻腔进行激发。IL-9中和抗体组和同型对照组的小鼠在OVA激发前30分钟,分别给予10μg IL-9中和抗体和抗IL-9同型对照抗体,对照组小鼠在各阶段均用生理盐水替代OVA进行致敏和激发。第25天,在最后一次鼻内给药10分钟内,记录小鼠鼻部抓鼻和打喷嚏次数。第25天末次给药两小时后,处死小鼠。每组取5只小鼠整个头部,浸泡在4%多聚甲醛中,固定后在10%乙二胺四乙酸中脱钙28天。标本石蜡包埋,冠状切片,切片厚度为4μm,然后使用苏木精和伊红染色检测嗜酸性粒细胞。取各组剩余5只小鼠鼻粘膜,将其分为两部分:第一部分使用流式细胞微球技术检测鼻黏膜中IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17的蛋白质水平含量;使用流式细胞术检测鼻黏膜中Th1、Th2、Th9、Th17以及Treg细胞分数情况。第二部分-80℃下储存留以提取RNA使用,使用实时定量聚合酶链式反应检测鼻黏膜中Th细胞相关细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17)、Th细胞相关的特异性转录因子(T-bet,Gata3,PU.1,Irf4和Rorγt)以及Treg细胞的特异性转录因子Foxp3的mRNA水平表达情况。结果:变应性鼻炎鼠鼻部症状(包括打喷嚏以及抓鼻)以及黏膜中嗜酸性粒细胞数明显高于对照组;在使用IL-9中和抗体干预后,相应的鼻部症状得以改善,嗜酸性粒细胞的数量下降。变应性鼻炎鼠黏膜中Th9反应增高;变应性鼻炎鼠模型鼻粘膜中Th细胞相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-9、IL-17蛋白水平要明显高于对照组,在使用IL-9中和抗体后,这四种细胞因子水平得到了有效的控制。mRNA水平上,变应性鼻炎中IL-4、IL-9以及IL-17的表达量要明显高于对照组,并经IL-9中和抗体干预后,这三种细胞因子的表达量得到了有效的控制,而变应性鼻炎中IFN-γmRNA水平虽略高于对照组,但没有统计学差异,不过在使用IL-9中和抗体后,IFN-γmRNA水平下降明显。变应性鼻炎中Gata3,PU.1,Irf4和Rorγt mRNA表达水平要显著高于对照组,IL-9中和抗体干预后,它们的表达量均呈现下降趋势,而T-bet mRNA水平在四组间差异不明显;相比于对照组,Foxp3基因表达量在变应性鼻炎中明显降低,IL-9中和抗体干预后,它的含量呈现升高趋势。变应性鼻炎中Th2,Th9以及Th17细胞分数要显著高于对照组,IL-9中和抗体干预后它们的分数水平均降低,但Th1细胞分数在四组间差异不明显,Treg细胞分数在变应性鼻炎中要显著低于对照组,使用IL-9中和抗体后,它的分数比例升高。结论:我们首次证实Th9细胞参与了变应性鼻炎的发生发展,并且IL-9中和抗体具有广泛的抗炎作用,不但可以改善变应性鼻炎症状,而且能够抑制Th2、Th9以及Th17反应,增强调节性T反应。我们希望该研究结果能够提高人们对变应性鼻炎发病机制的认识,并有助于开发新型抗体来治疗该疾病。