【摘 要】
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猪瘟( Classical Swine Fever, CSF),是危害我国养猪业的最重要的一种高度接触性烈性传染病之一。多年来一直是我国猪病防治研究的首要对象之一。世界许多国家虽然采取了许多
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猪瘟( Classical Swine Fever, CSF),是危害我国养猪业的最重要的一种高度接触性烈性传染病之一。多年来一直是我国猪病防治研究的首要对象之一。世界许多国家虽然采取了许多措施较好地控制了猪瘟的大规模爆发流行,但自上世纪70年代末以来猪瘟的流行与发病特点发生了很大的变化,近年来我国猪瘟的发生又呈上升趋势,临床表现更为复杂,而且免疫猪群发生猪瘟越来越多。本试验采用纯化后的猪瘟兔化弱毒病毒液免疫六周龄健康BALB/c小鼠,用间接ELISA检测免疫抗体滴度,取免疫鼠脾细胞与FO骨髓瘤细胞用PEG1500进行融合并筛选,最终获得一株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将得到的阳性细胞注入小鼠腹腔,收取腹水,测定效价,间接ELISA试验检测腹水单抗效价为1:105,杂交瘤细胞上清液的抗体效价为1:160。用间接ELISA检测,该单抗只与猪瘟病毒呈阳性反应,而与鸽新城疫病毒,猪繁殖呼吸综合症病毒,猪传染性胃肠炎病毒,鸡产蛋下降综合征病毒无交叉反应。为建立一种快速、简便的检测猪瘟病毒的胶体金免疫层析法。采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,用辛酸-硫酸铵盐析法纯化小鼠抗CSFV抗体,确定标记胶体金的最适pH值和抗体的最佳包被量,用胶体金标记抗体,并包被在玻璃纤维膜上,另外将纯化的CSF抗体和羊抗鼠抗体包被在硝酸纤维膜上,组装成CSF快速检测条,对猪瘟病毒进行检测。使用所研制CSF快速检测条,检测收集的70份待检样品,检出猪瘟阳性病例26例,而经病毒分离鉴定阳性病例有28例,阳性符合率达92.8%,将5份阳性猪瘟病毒稀释后用试纸条和ELISA方法进行敏感性实验,结果表明诊断试纸条的敏感性较高,用试制条对NDV、EDS-76病毒、TGEV、猪繁殖呼吸综合症病毒进行检测,无交叉反应。结果显示,所研制的CSF试剂条在用于CSF诊断时,具有快速、灵敏、特异、简便等特点,其应用价值十分广阔。
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