NJA-1菌产环氧化物水解酶条件的优化及对脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物转化的研究

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真菌毒素是由真菌或霉菌产生的有毒次级代谢产物,广泛污染各种饲料原料和成品饲料。动物误食被真菌毒素污染的饲料会造成动物的真菌毒素中毒。脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalnol,缩写DON)又称呕吐毒素(vomitoxin),属单端孢霉烯族B族化合物,是镰刀菌产生的一种真菌毒素,主要污染谷物及其制品。在自然界中广泛存在,目前被认为是存在于赤霉病小麦中的主要天然毒素之一。最新研究发现,酶可通过将这些霉菌毒素的分子分解为无害的代谢物而将毒素的毒性去除。而环氧酶则可分解单端孢霉烯族菌毒素分子中的环氧基团。这些酶可以降解真菌毒素的代谢物或改变它们的分子结构来产生更少的毒素或者是那些可以代谢或吸收无害的成分。本论文主要研究在于优化NJA-1菌产环氧化物水解酶的条件,初步研究环氧化物水解酶的酶学性质并且生物转化DON。试验ⅠNJA-1菌产环氧化物水解酶条件的优化本实验室从土壤中分离得到一株NAJ-1菌株。本章实验主要是通过研究碳源、氮源、金属离子等培养基细分,以及pH、温度、装液量、添加诱导物等因素对菌株产酶的影响,优化产环氧化物水解酶的条件。实验结果表明:在本实验条件下此菌培养的最佳碳氮源组成是1%葡萄糖,1%玉米浆,培养基的初始pH为4.0,培养的最佳温度和时间是30℃下培养32h,低浓度底物苯基环氧乙烷对该酶具有诱导作用,培养基中的金属离子Ca2+、Mg2+对产酶有促进作用。试验Ⅱ环氧化物水解酶性质的初步研究本试验主要是利用NJA-1菌制备EH初酶液。并且用制备的初酶液进行环氧化物水解酶(EH)酶学性质的初步研究。试验结果表明,EH的最适反应温度是30℃,最适pH是pH 7.0;25-40℃范围内酶具有较好的热稳定性,pH 6.5-8.0范围内酶的稳定性较佳,Mg2+、Ca2+离子可促进酶活,有机溶剂DMSO可轻微促进EH酶活。试验Ⅲ菌体及初酶液对DON的转化本实验采用菌体及制备的初酶液和EH酶液,加入不同浓度的DON(浓度分别为:4μg/mL,8μg/mL,20μg/mL,100μg/mL),30℃反应不同时间,用高效液相色谱(HPLC)测定DON的含量。结果表明:相比于未优化菌体,优化菌体其对DON转化率增加11.2%;初酶液可显著生物转化DON,转化率可达70~80%;初酶液和EH酶液都可生物转化DON为几种不同的物质,其出峰时间及数量基本相同。
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