研究背景不孕症已成为继癌症、心脑血管疾病后影响人类身心健康的第三大疾病,给社会和家庭带来了沉重负担。近年来,辅助生殖技术的发展,特别是体外受精—胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）和卵胞浆内单精子显微注射技术（Intracytoplasmic sperm injection,ICSI）给不孕症患者带来了福音。然而,辅助生殖技术的临床妊娠率仍然维持在40%左右。回顾40余年来IVF-ET的发展历程,胚胎着床率低下一直是制约临床妊娠率的瓶颈。在IVF-ET周期中,胚胎只有顺利着床才能继续妊娠,而良好的子宫内膜容受性是胚胎成功着床的先决条件。目前IVF-ET治疗中的难题:不明原因反复着床失败（Recurrent implantation failure,RIF）主要与子宫内膜容受性低下有关[1]。目前国内外主要认为,RIF是指在排除了畸形宫腔、输卵管积水和异常核型的小于等于40岁的女性中,进行体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）后,在至少三个新鲜或冷冻胚胎移植周期中,移植至少四个优质胚胎(胚胎质量评分≥7[2])后未能成功妊娠[3]。其发生率约占IVF-ET周期数的10%[4-6],这极大地困扰着临床医生,也造成了胚胎资源的严重浪费、增加了患者的经济负担和心理创伤,并且是制约辅助生殖技术成功率提高的主要原因之一。目前,临床上急需能够改善子宫内膜容受性、提高IVF-ET临床妊娠结局的方法和手段。因此为解决这一临床需求,研究和发现调控子宫内膜容受性的生物学标志物及其作用机制是十分必要的,对于提高辅助生殖技术的妊娠率具有重要意义。遗憾的是,哺乳动物子宫内膜容受性的调控机制至今尚不十分清楚。所以,探讨调控子宫内膜容受性的分子机制、改善子宫内膜容受性的研究刻不容缓。研究目的本研究的目的是探讨PECAM1低表达对RIF患者子宫内膜容受性的影响和分子机制,明确PECAM1在调控子宫内膜容受性中所发挥的重要作用,以期发现新的子宫内膜容受性调控机制及改善人子宫内膜容受性的潜在药物靶点。材料与方法经过医院伦理委员会的批准,在不孕夫妇知情同意的情况下,本课题组将开展以下研究:1、收集RIF患者（RIF组）和单纯输卵管因素所致继发性不孕女性（对照组）分泌中期（LH+7）的子宫内膜组织,采用基因芯片、生物信息学分析筛选差异基因,并采用实时荧光定量PCR（Reverse transcription-quantitative real-time PCR,RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学（Immunohistochemistry）技术对候选基因进行进一步验证;2、收集月经不同时期,即月经增生早期、增生晚期、分泌中期的子宫内膜组织,采用Western blot检测PECAM1和HOXA10在月经不同时期子宫内膜组织中的表达;采用免疫荧光（Immunofluorescence）研究PECAM1在对照组分泌中期子宫内膜组织中的定位;3、采用RT-qPCR、Western blot和IHC验证PECAM1下游因子TGF-β1在RIF组和对照组中的表达情况;4、使用PECAM1 sh RNA质粒,对子宫内膜癌Ishikawa细胞和原代人子宫内膜上皮细胞、间质细胞进行转染,观察PECAM1表达水平下降对子宫内膜细胞中TGF-β1表达量的变化以及对子宫内膜癌细胞的增殖、黏附、迁移能力的影响。研究结果1、通过基因芯片表达谱和生物信息学分析,从RIF组和对照组的分泌中期子宫内膜组织的比对中获得了2519个差异倍数＞2、P值＜0.05的差异性表达基因（Differentially expressed genes,DEGs）,其中1809个基因上调,710个基因下调。GO分析根据基因的生物学过程（biological processes）、分子功能（molecular functions）和细胞组成（cellular components）将这些基因分组。我们发现“细胞黏附”（cell adhesion）以及“黏附”（adhesion）在富集的GO条目中所占比例最大。为进一步发现在RIF发生中起关键作用的细胞黏附分子,大量数据库筛查和文献阅读后,我们锁定了5个与胚胎着床相关但尚未在RIF中研究的黏附分子,它们是ICAM2（intercellular adhesion molecule 2）、ITGB2（integrin subunitβ2）、PECAM1（platelet and endothelial cell adhesion molecule 1）、SELP（selectin P）和TEK（TEK receptor tyrosine kinase）;2、通过对RIF组和对照组的分泌中期子宫内膜组织进行RT-qPCR、Western blot以及IHC验证,我们发现只有PECAM1在芯片水平、m RNA水平以及蛋白水平表达最为一致,即RIF组的PECAM1表达水平显著低于对照组;免疫荧光检测发现PECAM1在子宫内膜上皮和间质细胞中均有表达;3、在月经不同时期的子宫内膜组织中,PECAM1的表达呈动态变化,即PECAM1在月经增生早期表达水平较低,增生晚期表达水平开始升高,并在分泌中期达到最高水平;4、使用RT-qPCR、Western blot和IHC在对照组和RIF组中对分泌中期子宫内膜TGF-β1的表达水平进行验证。结果显示TGF-β1在RIF组的表达水平显著低于对照组;5、使用PECAM1 sh RNA降调Ishikawa细胞、原代人类子宫内膜上皮细胞、间质细胞中PECAM1的表达水平后,TGF-β1的表达水平也显著下降;此外,在Ishikawa细胞中降调PECAM1的表达后,可使Ishikawa细胞的黏附能力和迁移能力均降低,但对其增殖能力无影响。研究结论黏附分子PECAM1定位在子宫内膜的上皮细胞和间质细胞,其在月经不同时期的子宫内膜中呈动态表达趋势;PECAM1在RIF患者分泌中期子宫内膜中的低水平表达不利于子宫内膜容受性的建立,PECAM1表达下降通过影响子宫内膜细胞黏附或迁移,从而降低子宫内膜容受性。