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目的:揭示M3受体参与心房颤动离子重构过程的机制,阐明房颤发生的新靶点-M3受体,为筛选抗房颤靶点提供理论依据。
方法:(1)建立快速心房起搏犬房颤模型,利用western blot技术和全细胞膜片钳技术,观察快速起搏组和假手术组心房肌细胞M3受体表达及其介导的延迟整流钾电流(IKM3)电流变化;(2)酶解法分离豚鼠心肌细胞,膜片钳技术观察M3受体对心肌细胞Ica-L的调节作用。
结果:(1)持续性心房颤动组的犬心房肌细胞M3受体蛋白表达较假手术组升高1.18±0.14倍(n=6,P＜0.05),其介导的IKM3电流密度明显增高,在实验电压+50 mV时,2.59±0.39 pA/pF vs2.18±0.43 pA/pF(n=7,P＜0.05);(2)M3受体激动剂胆碱(Choline)10mmol/L能够明显抑制心肌细胞Ica-L,使其电流峰密度从9.12±0.75 pA/pF减少到5.684±0.63pA/pF(n=6,P＜0.01),M3受体阻断剂4-DAMP5 nmol/L能够使其恢复至8.18±0.57pA/pF(n=6,P＜0.01)。Choline对通道的失活曲线和复活曲线无明显影响,但使激活曲线右移,相应动力学参数V1/2(半数激活电压)由给药前的-20.86±1.23mV减少到-18.13＋1.26mV(n=6,P＜0.05),4-DAMP使其恢复到-20.64±1.58(n=6,P＜0.05)。K值(斜率因子)给药前为5.42±0.38,给予Choline后为4.45±0.37,4-DAMP使其恢复到5.324±0.29(n=6,P＜0.05)。
结论:在持续性心房颤动犬模型中,心房肌细胞M3受体的表达及其介导的IKM3电流密度明显增加,缩短心房细胞的动作电位时程及有效不应期,加速房颤的发生和发展过程;M3受体激动可使心肌细胞Ica-L激活曲线右移,从而抑制Ica-L,加重房颤时Ica-L密度下调。M3受体通过增加IKM3和抑制Ica-L,参与房颤的离子重构过程,M3受体可能是未来治疗房颤的新靶点。