背景:动脉粥样硬化是以血管慢性炎症为特征的一种脉管疾病,而单核细胞被招募进入动脉壁内皮下间隙并吞噬脂质成为泡沫细胞是其主要特征之一。在CXC趋化因子家族中,CXCL12/CXCR4信号轴与动脉粥样硬化发病机制相关性的讨论由来已久,该信号轴加重了与免疫细胞募集相关的各种炎症性疾病。CXCL14是CXC家族的一种新型免疫细胞趋化剂,它具有与CXCL12类似的结构,而与动脉粥样硬化发病机制的关系尚未可知。目的:本文旨在研究CXCL14蛋白在动脉粥样斑块中的表达及可能的调控机制,并进一步探究其在动脉粥样硬化疾病进程中的作用,为找到相应的潜在靶点提供依据。方法:1.用免疫组织化学方法检测动脉粥样硬化患者粥样斑块中CXCL14的表达。2.分别在小鼠原代巨噬细胞与PMA(佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯)诱导的THP-1细胞中用real-timePCR与蛋白印迹实验检测CXCL14在泡沫细胞中的表达。3.在小鼠原代巨噬细胞中检测ox-LDL(氧化低密度脂蛋白)刺激后转录因子AP-1的活性,并用荧光素酶报告基因实验证明AP-1与CXCL14启动子的直接作用关系。4.采用transwell及油红O染色检测重组CXCL14在THP-1细胞迁移和吞噬脂质中的影响。5.划痕实验检测重组CXCL14对于肺动脉血管平滑肌细胞迁移的作用,CCK-8实验检测其对于细胞增殖的影响。6.用重组CXCL14刺激THP-1细胞和平滑肌细胞,通过免疫印迹检测ERK磷酸化水平的变化,同时检测ERK磷酸化对上述细胞效应的影响。7.在用ApoE-/-的C57小鼠构建的动脉粥样硬化动物模型中,注射抗CXCL14短肽,检测各组小鼠动脉血管损伤及斑块大小,评估动脉粥样硬化疾病进展。结果:采集患者的临床信息并对组织标本做免疫组织化学染色,发现CXCL14在动脉粥样硬化患者的粥样斑块中高表达,且主要存在于巨噬细胞来源的泡沫细胞。ox-LDL的刺激能让小鼠原代巨噬细胞CXCL14表达升高,同时,用PMA诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞后,其对ox-LDL的刺激有相同反应。我们在小鼠原代巨噬细胞中研究了ox-LDL刺激下转录因子AP-1的表达及活性,AP-1的两个亚基c-jun和c-fos均不同程度地表达升高。其下游c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平也上升,当用JNK通路的抑制剂阻断c-jun的活化时,CXCL14的表达也受到影响。同时,利用荧光素酶报告基因实验,证明了AP-1能与CXCL14的启动子区域直接结合并发挥转录活性。关于巨噬细胞来源的泡沫细胞高表达CXCL14后如何进一步影响斑块的形成,我们做了针对单核巨噬细胞与平滑肌细胞的体外细胞功能实验。Transwell实验证实重组CXCL14能促进THP-1细胞的募集,而油红O染色结果显示,CXCL14处理过的巨噬细胞吞噬脂质的能力更强。划痕实验用于检测CXCL14对平滑肌细胞迁移的影响,CXCL14明显对肺动脉平滑肌细胞迁移有促进作用,同时,CXCL14对平滑肌细胞的增殖也有轻微影响,这对粥样斑块的发展同样重要。用CXCL14以不同时间刺激THP-1细胞与肺动脉平滑肌细胞,下游信号ERK磷酸化水平显著上升,在10分钟左右达到峰值。另外,当用CXCL14分别刺激fr180204(ERK通路抑制剂)预处理过的THP-1细胞和平滑肌细胞,其对相关细胞功能的促进作用被抵消。在ApoE-/-的C57小鼠构建的动脉粥样硬化动物模型中,皮下注射抗CXCL14短肽,完整剥离主动脉并剖开进行油红O染色,发现注射抗CXCL14短肽组较之干扰剂组,血管损伤明显降低。取主动脉弓全层切片评估斑块大小,我们发现了类似的结果,抗CXCL14组较之干扰剂组斑块较小。动物实验较为直观地体现了CXCL14在动脉粥样硬化斑块形成过程中的重要作用。结论:Ox-LDL通过转录因子AP-1上调巨噬细胞来源的泡沫细胞中的CXCL14,而斑块中高表达的CXCL14进一步影响单核细胞的募集、巨噬细胞的脂质吞噬,同时增进平滑肌细胞的迁移与增殖。综上,CXCL14正反馈环路加速了粥样斑块的形成,这为CXCL14成为预防并医治动脉粥样硬化的新潜在靶点提供依据。