猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是给养猪业造成巨大经济损失的病毒之一,可以感染各个年龄阶段的猪,但是7日龄以内的仔猪最为易感,在没有有效的母源抗体的保护下,发病率和死亡率为80%～100%。自猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）在2010年重新爆发以来,传统疫苗不能提供有效的保护。因此,揭示变异毒株细胞传代过程中不同代次的全基因组的变化过程,可为进一步了解PEDV的遗传变异规律和致病机理提供理论依据。本研究对ZH02株第200代和第6代病毒全基因组进行了测序,并将ZH02-P0、ZH02-P6、ZH02-P65和ZH02-P200的全基因组序列进行比较。结果发现,与其他代次的毒株相比,ZH02-P200毒株突变最显著的是ORF1a/b基因和S基因,比较保守的是ORF3、E、M和N基因。在ORF1a/b基因中,存在21个核苷酸的有义突变,469个核苷酸的缺失,其中,非结构蛋白Nsp3、Nsp12～13的变异最明显。S基因中,存在10个核苷酸的有义突变,36个核苷酸的缺失,中和表位COE的突变最为严重,另外在S基因胞质区缺失的2个核苷酸使得S蛋白的翻译提前终止。除此外,在M、N基因上还有4个核苷酸和7个核苷酸的有义突变。这些结果表明,PEDV的致病性减弱是通过多个基因的变异导致的。本文还进行了动物回归实验,分别给A、B两组7日龄仔猪口服了2 mL 1×106.0TCID50/mL的6代和200代毒株病毒液。攻毒160 h后,B组仔猪没有死亡,在其十二指肠和肠道淋巴结的研磨液中没有检测到PEDV的存在。A组仔猪有感染PEDV的典型临床症状并死亡,在其十二指肠和肠道淋巴结的研磨液中可以检测到PEDV的存在。这表明,ZH02-P200毒株在细胞传代过程中已致弱,有希望成为疫苗候选株。在本研究中,我们利用有限稀释法筛选出分泌抗PEDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。在已经感染PEDV的Vero细胞中,以抗PEDV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠IgG为二抗,建立PEDV的间接免疫荧光（Indirect immunofluorescence assay,IFA）检测方法。将单克隆抗体应用在IFA时,最适条件为:80%丙酮-20℃固定30 min;一抗1:1000稀释,4℃过夜孵育;二抗1:100稀释,37℃孵育1 h。以该抗体为一抗建立的检测PEDV IFA方法具有良好的特异性,为PEDV的实验室检测及PEDV在感染细胞中的定位和动态分布提供了有效的手段。