木犀草素通过IL-17/NF-kB通路缓解鸡毒支原体感染肉鸡导致的免疫损伤

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鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)感染引起鸡慢性呼吸道病(Chronic respiratory disease,CRD),导致鸡群生产性能降低,给家禽业带来巨大经济损失。目前治疗CRD主要使用抗生素,而由于抗生素的耐药性和产品药物残留问题日趋严重,急需寻找新的药物替代抗生素。中草药具有来源广、天然绿色、抗菌抗炎、提高免疫力,耐药性低等独特优势,在CRD的治疗中取得了良好的研究进展。研究表明,木犀草素(luteolin,Lut)易吸收,且具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用。本试验通过体外抑菌试验、饲养试验和细胞试验探究Lut防治MG感染的效果及其作用机制,为Lut防治CRD的临床应用提供科学依据。主要研究结果如下:1.倍比稀释法测定Lut对MG的最小抑菌浓度(MIC)为12.5ug/ml,抑菌活性强。2.饲养试验中,Lut单独处理组与空白对照组生产数据无差异(p>0.05),表明Lut无毒副作用。Lut预防7d后攻毒5d,MG组与空白对照组和预防组相比,MG组鸡生产性能显著降低;治疗7d后,泰妙治疗组、Lut预防组、Lut高/中剂量组的饲料利用率和体增重与MG组相比均显著升高(p<0.05),停药后14d,各组料肉比与体增重情况同治疗期相同,其中高剂量治疗组及高/中剂量预防组治愈率均在93.3%以上,效果与泰妙菌素相当,表明Lut在MG的防治中具有良好的效果。3.通过格罗斯气囊评分,Lut可有效降低气囊损伤;胸腺和脾脏病理切片显示,Lut可有效缓解MG感染引起的胸腺和脾脏的损伤。4.通过免疫器官指数、血清中免疫因子IgA、炎性因子IL-17、IL-1β、TNF-α、IL-6的蛋白含量,评价Lut和MG对免疫功能的影响。结果表明,Lut可提高免疫器官指数,增强机体体液免疫,缓解MG感染引起的炎症反应。5.通过网络药理学对Lut作用靶点和MG作用靶点进行筛选和通路富集,发现Lut可能通过IL-17/NF-k B信号通路在MG感染中发挥作用。6.RT-qPCR检测胸腺中IL-17/NF-k B通路相关基因IL-17A、IL-17F、TRAF6、NFKBIA、CXCL1、CXCL2、IL-6、IL-1β、TNF-α、MMP2、MMP9、β-防御素的m RNA表达发现,Lut可以显著抑制MG感染后IL-17/NF-k B通路相关基因表达的表达(p<0.05),提高机体的免疫反应,抵抗MG感染。7.巨噬细胞中转染Si IL-17,RT-qPCR和ELISA检测IL-17/NF-k B通路相关炎症因子IL-17、IL-1β、TNF-α、IL-6的表达,结果显示,Lut防治能显著下调MG感染后炎症因子的表达(p<0.05),抑制IL-17后炎症因子的表达进一步下调,表明Lut可能通过IL-17/NF-kB通路抑制炎症因子的表达,从而抑制MG。综合研究结果,Lut预防和治疗可有效缓解MG感染引起的生产性能下降,降低死亡率,减轻气囊损伤和免疫器官病理病变,提高免疫器官指数和血清中免疫球蛋白含量,提高机体免疫力。在胸腺和巨噬细胞中,Lut可通过抑制IL-17/NF-kB信号通路缓解MG诱导的免疫炎症反应,抵抗MG感染。
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