利用粉红聚端孢几丁质酶Trchi1基因和嗜热真菌Mnsod基因提高水稻抗性的研究

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几丁质酶(Chitinase)被普遍认为是一种与抗真菌病害有关的酶。菌寄生真菌产生的几丁质酶可以降解真菌的细胞壁,对病原真菌的菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长有抑制作用。转真菌几丁质酶基因的作物具有较高的抗病性,且抗病性持久、抗病谱广,还可以提高抗虫能力。超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, S OD)能够催化超氧阴离子(O2·-)发生歧化反应,从而清除O2·-,使生物体能够防御氧化损伤。植物在遭受到包括高盐、干旱、低温和高温等环境胁迫时可产生大量活性氧。活性氧能够破坏细胞内的大分子,使DNA裂解,造成膜的损伤或影响蛋白质的合成及稳定性等,影响植物生长发育。SOD通过清除细胞内的活性氧、减少细胞内部的活性氧累积,可以减轻逆境对植物细胞的伤害,对增强植株的耐盐等抗逆能力具有重要作用。粉红聚端孢(Trichothecium roseum)是一种重要的重寄生真菌,它能有效抑制多种植物病原真菌的扩展和危害,产生的胞外几丁质酶能够参与重寄生和抗性互作的过程。疏绵状嗜热丝孢菌(.Thermomyces lanuginosus)和嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var. levisporus)是广泛分布的,生长上限温度较高的嗜热真菌,从这二种真菌中已分离了多种嗜热酶,具有较高的研究和应用价值。本实验从前人已保存的菌种中,通过特异性扩增得到粉红聚端孢(T. roseum)几丁质酶trchil基因,疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus) zjmnsod酶基因,嗜热子囊菌光孢变种(T. levisporus) esjmnsod酶基因。为了验证粉红聚端孢几丁质酶基因trchil,疏绵状嗜热丝孢菌zjmnsod和嗜热子囊菌光孢变种esjmnsod基因的功能,将trchil、zjmnsod及esjmnsod基因分别构建到Maize Ubiquitin启动子驱动的植物表达载体pCAMBIA1300中,通过农杆菌介导法转化水稻。经PCR和]RT-PCR检测表明粉红聚端孢几丁质酶基因trchil、疏绵状嗜热丝孢菌zjmnsod和嗜热子囊菌光孢变种esjmnsod基因分别整合到水稻基因组中,并在水稻中有效表达。转几丁质酶基因trchil的水稻对水稻纹枯病的抗性明显增强;转疏绵状嗜热丝孢菌zjmnsod和嗜热子囊菌光孢变种esjmnsod基因的水稻植株,其种子萌发及幼苗生长阶段的耐盐性增强。本实验为水稻育种工作提供新的抗性资源,为通过转基因技术提高水稻抗性和产量提供科学的依据。
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