肝血窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cell,LSEC）是肝脏内的一种组织特异性血管内皮细胞,占肝脏所有细胞的约15-20%。LSEC表面具有区别于其他内皮细胞的窗孔结构、无基底膜、以及特异性分子表达谱等特点,使得LSEC具有血流调节、免疫调节、物质交换和强大的内吞功能,并在肝再生、肝纤维化、肝癌等病理过程中发挥着重要的调控作用。因此,深入研究LSEC表型和生物学行为的分子调控机制有助于寻找靶向LSEC治疗肝脏相关疾病的新靶点及新策略。Notch信号是一条介导相邻细胞间相互作用的高度保守的信号通路。文献及课题组前期研究均发现Notch信号可通过调控LSEC毛细血管化、衰老等行为,在肝脏稳态中发挥关键调控作用。在探讨Notch信号调控内皮细胞的下游分子中,课题组前期利用小RNA测序发现一系列受Notch信号调控的miRNAs,其中miR-218被证实在Notch信号下游调控内皮细胞增殖。然而,miR-218是否介导Notch信号调控LSEC行为和功能仍不清楚。此外,miR-218的下游靶分子和作用机制仍有待于进一步阐明。为明确Notch信号在调控LSEC表型变化的过程中,对miR-218的表达调控作用;阐明miR-218介导Notch信号对LSEC表型和功能的影响;以及miR-218调控LSEC表型和功能的下游分子机制,我们对小鼠原代LSEC进行体外miR-218腺病毒转染;利用扫描电镜实验、Ac-LDL内吞实验、Ed U实验等实验方法对LSEC的窗孔结构、内吞功能以及增殖能力进行检测;利用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光染色等方法检测特定mRNA和蛋白质的表达;利用转录组测序筛选miR-218的下游分子,对机制进行探究。实验结果表明miR-218过表达加速了LSEC的去窗孔化并抑制了LSEC增殖和内吞能力;Notch信号激活上调miR-218并抑制LSEC内吞受体窗孔相关分子的表达,miR-218直接靶向Pou2f1的3’-非编码区,降低其mRNA和蛋白水平;过表达Pou2f1可有效挽救miR-218对LSEC中内吞受体Lrp1的抑制作用。最终证实Notch信号可通过上调miR-218抑制LSEC表面内吞受体Lrp1的表达,这一作用可通过靶向抑制Pou2f1实现。