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本课题组前期实验已证实了鼠心肌细胞培养液在体外具有抑制人鼻咽癌细胞生长的活性，并具有时间依赖性，而对正常细胞鼠肾小球系膜细胞的生长则无明显抑制效应，为此我们推测心肌细胞培养液中可能含有某种（些）抑瘤物质。进一步研究发现其抑瘤机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关。为此本课题组进行了体内实验研究，结果发现心肌细胞培养液能抑制CNE2裸鼠移植瘤和S180小鼠移植瘤的生长，而对小鼠的正常生长无影响，从而证实了心肌源性抑瘤物的有效性和安全性。目的：前期的体内外实验均表明鼠心肌细胞培养液（myocardial cells culturemedium，CMCM）可抑制人鼻咽癌低分化鳞癌细胞系（CNE-2）的生长，其机制可能与诱导细胞凋亡有关。本实验力图进一步研究CMCM对多种肿瘤细胞生长的抑制作用，充分证实CMCM的抑瘤现象及其抑瘤活性的广谱性。并在本课题组前期实验基础上初步探讨其引起肿瘤细胞发生凋亡的相关分子机制及其信号通路，为探明心肌源性抑瘤物抑瘤机制提供更加充分的科学实验依据。方法：1.原代培养鼠心肌细胞，收集心肌细胞培养液（CMCM）,超滤获得<10KD的CMCM。2.以顺铂（DDP）作为阳性对照，DMEM培养基作为阴性对照，用<10KD的CMCM干预培养人宫颈癌细胞Hela,小鼠肺癌细胞Lewis,正常大鼠肝细胞BRL48小时后，采用MTT法检测细胞存活情况，计算细胞存活率。同时采用类似方法检测CMCM不同时间点（24h,48h,72h）对Hela细胞存活率的影响,并绘制生长曲线。3.DMEM培养基为阴性对照，用酶标仪检测CMCM干预CNE-2细胞48小时后的细胞内Caspase3, Caspase8和Caspas9酶活性。4.采用基因芯片检测CMCM干预CNE-2细胞48小时后的凋亡相关基因的表达差异。结果：1. MTT法检测发现48小时的CMCM组Lewis细胞，Hela细胞存活率分别为64.69±15.86%，42.97±6.45%与阴性对照组（100.00±12.61%，100.00±12.87%）相比差异具有统计学意义（P<0.05），与顺铂组（60.51±12.20%，34.57±3.26%）相比，差异无统计学意义（P>0.05）,而对于BRL细胞，CMCM组其存活率（90.87±12.79%）与阴性对照组（100.00±12.00%）相比，差异则无统计学意义（P>0.05），与阳性对照组顺铂（59.65±9.17%）相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。同样采用MTT法检测CMCM不同时间点对Hela细胞增殖的影响。结果显示24小时时，48小时时CMCM组Hela细胞存活率分别为65.75±4.30%，42.97±6.45%。与阴性对照组（100.25±5.95%，100.00±12.87%）相比均存在差异（P<0.05），与顺铂（61.31±4.26%，34.57±3.26%）相比则无显著差异（P>0.05）。随着时间延长，至72小时时CMCM组细胞存活率降至23.95±4.56%，与DDP组（17.89±1.34%）相比，差异无统计学意义（P>0.05），与而阴性对照组（100.11±1.58%）相比差异则具有统计学意义（P<0.05）。2.通过基因芯片检测CMCM干预后的凋亡相关基因变化的研究发现，实验组（CMCM组）与对照组比较，在凋亡相关基因中，有3个表达上调基因，2个表达下调基因。3.酶标仪检测Caspase3, Caspase8和Caspas9蛋白酶活性发现，CMCM干预48小时后的CNE-2细胞，其包内Caspase3, Caspas9活性同阴性组相比其活性升高，CMCM组OD值分别为0.271±0.016，0.215±0.018，阴性组的OD值则为0.179±0.010，0.134±0.015。两组间差异有统计学意义（P<0.05）。而对于Caspase8的酶活性，CMCM与阴性组的OD值分别为0.196±0.016，0.185±0.020。差异无统计学意义（P<0.05）。结论：心肌细胞培养液（CMCM）同顺铂一样可以抑制肿瘤细胞Hela细胞, Lewis细胞的生长，但对正常肝细胞BRL的生长则无显著影响,再次证实了心肌细胞培养液对肿瘤细胞的体外抑瘤效应。在本课题期组前期已证实CMCM可诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的基础上，此次基因芯片检测初步揭示了通路基因表达的变化，我们初步推测线粒体介导的非Caspase依赖凋亡通路可能参与了心肌细胞培养液调控的鼻咽癌细胞凋亡，也为后续研究提供了介入点。于此同时对细胞内Caspase凋亡蛋白酶活性的检测，则发现心肌细胞培养液诱导的人鼻咽癌细胞凋亡与Caspase3, Caspase9蛋白酶的活化有关。综合基因芯片及凋亡蛋白酶活性检测的结果，同时考虑细胞凋亡通路本身的交叉复杂性，我们推测CMCM作为一混和物并非仅仅激活单一的一条信号通路来诱导鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡，它可以通过不同的信号通路发挥其凋亡效应。