酶解玉米麸皮制备阿魏酰低聚糖及抗氧化性质的研究

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阿魏酰低聚糖(FOS)是阿魏酸与低聚糖通过酯键结合在一起形成的化合物,因此兼具阿魏酸和低聚糖这两种物质的生理功能,且由于其结构中特殊的酯键,低聚糖阿魏酸酯能溶于水,具有双亲媒性和非离子属性,渗透性强,容易进入人体线粒体而发挥抗氧化作用。本文以玉米麸皮为原料,系统研究了玉米麸皮阿魏酰低聚糖的提取、分离纯化,并对其抗氧化活性功能性质进行了初步探索。主要研究内容和结论如下:(1)以脱脂、脱蛋白、淀粉玉米麸皮为原料,对复合纤维素酶水解玉米麸皮制备FOS的工艺进行了研究。以提取液的FOS提取量作为指标,在考察酶解体系pH值、温度、加酶量、底物浓度、反应时间5个单因素对FOS提取量影响的基础上,采用五因素四水平响应面分析法,确定了复合纤维素酶水解玉米麸皮制备FOS的最优条件为:pH5.3,反应温度51℃,加酶量7.62%(玉米麸皮),底物浓度11.03%,反应时间42h,此条件下产物中FOS的提取量达23.934μmol/g。(2)以脱脂、脱蛋白、淀粉玉米麸皮为原料,对微波辅助处理及复合纤维素酶水解玉米麸皮制备FOS的工艺进行了研究。首先研究了微波辐射预处理玉米麸皮对酶法制备FOS的影响。以提取液的FOS提取量作为指标,在考察微波预处理pH值、辐射时间、辐射功率、液料比4个单因素对酶法制备FOS的影响的基础上,采用四因素三水平响应面分析法,确定了微波预处理玉米麸皮的最佳条件为:pH值0.6,微波辐射功率622.4W,液料比10:1,微波辐射时间8min。玉米麸皮在微波最佳条件下经过预处理后,在酶解pH值5.0,温度50℃,加酶量6.0%(玉米麸皮),底物浓度10.0%,酶解时间4h条件下水解,产物中FOS的提取量达42.160μmol/g;然后在此基础上研究了微波辅助复合纤维素酶法制备FOS的工艺条件。以提取液的FOS提取量作为指标,玉米麸皮先经微波预处理后,酶解pH值、温度、加酶量、底物浓度、反应时间5个单因素对制备FOS的影响的基础上,采用四因素三水平响应面分析法,确定了微波辅助复合纤维素酶法制备FOS的最佳条件为:酶解pH值5.0,温度50℃,加酶量5.64%(玉米麸皮),底物浓度8.05%,酶解时间36h。此条件下,产物中FOS的提取量达119.509μmol/g。(3)通过静态实验和动态实验,从多种树脂中筛选出Amberlite XAD-2大孔吸附树脂层析纯化FOS提取液,并确定了Amberlite XAD-2纯化FOS提取液的最佳条件。首先通过静态实验确定树脂型号、上样液pH值、树脂最大吸附量。然后在静态实验的基础上,通过动态实验确定了玉米麸皮FOS酶水解液的Amberlite XAD-2大孔吸附树脂层析纯化的最佳条件为:上样pH值5.0,树脂最大吸附量5.88μmol/mL,上样流速1mL/min,上样量86.78μmol,水洗脱体积800mL,洗脱液为50%乙醇,洗脱流速8mL/min,洗脱时间135min,在此条件下FOS回收率达到91.64%。(4)经Amberlite XAD-2大孔吸附树脂层析纯化的样品,进一步采用SephadexLH-20凝胶过滤柱层析。通过单因素实验确定了Sephadex LH-20凝胶过滤柱层析纯化的最佳条件为:洗脱剂25%乙醇,上样量50mg/mL样品溶液1.5mL,洗脱流速0.5mL/min,在此条件下纯化得到五个组分,经HPLC法及红外光谱分析法测定确定为阿魏酰低聚糖。(5)初步研究了玉米麸皮FOS的抗氧化活性,包括清除超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH·能力,还具有抗油脂氧化能力和还原力等。玉米麸皮FOS50%清除超氧阴离子自由基能力(EC50)为3.082mg/mL、50%清除羟自由基能力(EC50)为4.0472mg/mL、50%清除DPPH能力(EC50)为0.7354mg/mL。
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