人Pif1蛋白的表达、纯化与生化分析

来源 :中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:snowlhj
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  为了对人细胞中酵母Pif1的同源蛋白进行生化功能分析,本文在多个系统中表达了hPif1蛋白,以及N端缺失但含有7个解旋酶模体的hPif1-Hel蛋白,最终在酵母表达系统中纯化得到了高纯度的hPif1-Hel蛋白。对纯化得到的hPif1-Hel蛋白进行了生化分析,检测到hPif1-Hel蛋白具有ATP酶活性和弱解旋酶活性。对ATP酶活性进行了一系列的分析,确定其ATP酶活性是依赖于二价阳离子的;在达到饱和之前其活性是随着单链核酸的浓度呈线性增长;多种核酸对ATP酶活性具有促进作用,单链核酸相比双链核酸,对于ATP酶的活性有着更为显著的促进作用;测定了ATP酶活性对ATP的Km值。
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