JMJD2A在子宫内膜癌和宫颈癌中的表达及其基因沉默对细胞影响的研究

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目的: JMJD2A(Jumonji domain-containing protein2A)是组蛋白去甲基化酶JMJD家族的成员,可以催化H3K9、H3K36与H1.4K26发生去甲基化。适当的JMJD2A的表达,可维持组蛋白赖氨酸甲基化与去甲基化之间平衡的调节,在正常细胞异染色质建立和维持中有重要的生物学意义。而过度的JMJD2A表达,可引起组蛋白赖氨酸甲基化与去甲基化失平衡,影响异染色质结构的稳定性,与肿瘤的发生发展有关。在人类许多肿瘤中JMJD2A呈现异常的过度表达,并且参与肿瘤的发生和发展,但JMJD2A在子宫内膜癌和宫颈癌中的表达情况及其作用国内外尚无相关研究。本实验分别探讨了JMJD2A在子宫内膜癌和宫颈癌中的表达情况,探讨了JMJD2A基因沉默后对子宫内膜癌RL95-2和Ishikawa细胞系及宫颈癌SiHa细胞系的生物学行为的影响。  方法:运用免疫组织化学方法分别检测JMJD2A在子宫内膜癌和正常子宫内膜组织、宫颈癌和正常宫颈组织中的表达情况。利用RNA干扰技术对子宫内膜癌和宫颈癌细胞进行瞬时转染,选取最佳转染浓度的JMJD2A-siRNA。用JMJD2A-siRNA和阴性对照siRNA分别转染子宫内膜癌RL95-2和Ishikawa细胞系及宫颈癌SiHa细胞系,利用Real-time PCR和Western blot方法检测沉默前后细胞中JMJD2A在mRNA和蛋白水平上表达的变化。应用WST-8法和Transwell小室检测JMJD2A基因沉默前后细胞增殖、迁移和侵袭能力的改变。  结果:免疫组化实验结果证实JMJD2A在子宫内膜癌组织中的表达显著地高于正常子宫内膜组织(x2=9.155,P<0.05),并且在细胞核和细胞质中均有表达,其在子宫内膜癌中的表达情况与年龄、组织学分级及临床分期无相关性(P>0.05); JMJD2A在宫颈癌组织中的表达显著地高于正常宫颈组织(x2=8.984,P<0.05),并且在细胞核和细胞质中均有表达,其在宫颈癌中的表达水平与组织学分级呈负相关,宫颈癌组织学分级越差,JMJD2A表达水平越高,而与年龄和临床分期无相关性(P>0.05)。JMJD2A沉默对子宫内膜癌细胞和宫颈癌细胞生物学行为的影响是相似的。JMJD2A-siRNA的最佳转染浓度为40nM/L。Real-timePCR和Western blot结果显示实验组中JMJD2A在mRNA和蛋白水平上的表达均明显低于阴性对照组(P<0.05)和空白对照组(P<0.05),而阴性对照组和空白对照组之间无明显差异(P>0.05)。WST-8实验结果显示实验组细胞的增殖效率与阴性对照组和空白对照组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而阴性对照组和空白对照组之间无明显差异(P>0.05)。Transwell小室结果显示实验组迁移和侵袭的细胞个数与阴性对照组和空白对照组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而阴性对照组和空白对照组之间无明显差异(P>0.05)。  结论:JMJD2A基因表达异常与子宫内膜癌和宫颈癌的发生发展关系密切,影响了子宫内膜癌和宫颈癌细胞的某些生物学行为,可能参与了子宫内膜癌和宫颈癌细胞的恶性转化。本实验认为JMJD2A可能是癌相关基因,可能是子宫内膜癌和宫颈癌药物治疗的一个新的靶点,为临床研制小分子药物提供了理论依据。  
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