三株海洋微生物胞外多糖的结构研究

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海洋蕴藏着丰富的资源,海洋微生物以其独特的生存环境能够产生很多具有新颖活性的胞外多糖。本课题从三株不同来源海洋微生物发酵液中提取胞外多糖,分离纯化得到纯品多糖。对纯品多糖的理化性质和结构特征进行分析。研究结果如下:1从辽东湾海泥放线菌Streptomyces sp.发酵液中提取得到胞外多糖粗品LD,利用Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Sephacryl S-100凝胶渗透柱层析分离纯化得到纯品多糖组分LDS2。PMP柱前衍生高效液相色谱法分析表明,LDS2中仅含有Man,为甘露聚糖。高效凝胶渗透色谱法结果显示,LDS2呈单一对称峰,纯度很高,分子量为21kDa。红外光谱、甲基化分析以及NMR分析表明,LDS2主要以→2)Manp(1→和→6)Manp(1→连接方式为主,也含有→2,6)Manp(1→,说明多糖糖链中存在分支结构。2从渤海海泥放线菌Streptomyces sp.发酵液中提取得到胞外多糖粗品BB,利用Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Sephacryl S-100凝胶渗透柱层析分离纯化得到两个纯品多糖组分BBW2-1和BBS2-1。PMP柱前衍生高效液相色谱法分析表明,BBW2-1中含有Man与Glu,摩尔比为1.0:15.4,BBS2-1中也仅含有Man与Glu,摩尔比为1.0:11.8,两者都主要由葡萄糖组成。高效凝胶渗透色谱法结果显示,两个多糖组分均呈单一对称峰,纯度很高,分子量分别为6.2kDa和6.1kDa,红外光谱、甲基化分析以及NMR分析表明,BBW2-1和BBS2-1中均主要以→4)Glcp(1→和→6)Glcp(1→连接方式为主,也含有较高比例的→4,6)Glcp(1→,说明多糖有较高的分支结构。此外,BBS2-1还含有少量的→2)Glcp(1→和→4)Manp(1→。3从海南红树林根泥真菌Aspergillus sp.发酵液中提取得到胞外多糖粗品HB,利用Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Sephacryl S-100凝胶渗透柱层析分离纯化得到四个纯品多糖组分HBW2-2、HBW2-3、HBS1和HBS2。PMP柱前衍生高效液相色谱法分析表明,HBW2-2和HBW2-3主要由Man和Gal组成,此外还含有少量的GalNAc,微量的GlcN和Glc。HBS1和HBS2主要由Man组成,此外,HBS1含有少量GalNAc,而HBS2含有少量Gal和微量Glc。高效凝胶渗透色谱法分析发现,HBW2-2、HBW2-3、HBS1和HBS2均呈单一对称峰,纯度很高,且分子量分别为12.5,7.1,34.1和9.4kDa。红外光谱和甲基化分析表明,HBW2-2主要有→4)Galp(1→、→3)Manp(1→及→2)Manp(1→连接方式,含有→2,6)Manp(1→,说明有支链结构存在。HBW2-3主要有→4)Galp(1→、→2)Manp(1→及→6)Manp(1→连接方式,同时含有→2,6)Manp(1→,说明有支链结构存在。特别是,HBW2-2和HBW2-3都含有Galf(1→。HBS1由相近比例的→2)Manp(1→、→4)Manp(1→及→6)Manp(1→连接成链,含有较高比例的→2,6)Manp(1→,说明有较高比例的分支结构。HBS2由相近比例的→4)Galp(1→、→2)Manp(1→及→6)Manp(1→连接成链,含有→2,6)Manp(1→和少量的→2,3)Manp(1→,支链程度较高。HBS2同HBW2-2和HBW2-3一样,都含有Galf(1→。本论文为“海洋糖库”的建设提供了结构新颖的海洋多糖,对进一步研究海洋微生物胞外多糖具有重要参考价值。
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