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艾滋病(acquireimmunodeficiencysyndrome，AIDS)由人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，HIV)引起，已成为本世纪危害人类健康最凶险的瘟疫。HIV可经过静脉吸毒、血制品污染、性交及母婴垂直感染等方式传播。除HIV本身的种类和数量、生殖器溃疡及其它性传播疾病外，宿主的HIV相关基因变异也是影响HIV感染传播和AIDS患者预后的重要因素之一.最近研究发现，树突状细胞(Dendrticcell，Dc)表达的特异性表面分子DC-SIGN与HIV-1感染传播密切相关，这是通过DC-SIGN与HIV-1包膜糖蛋白gp120结合实现的。DC-SIGN由胞浆外区、跨膜区和胞浆区组成，胞浆外区又可分为碳水化合物识别区和颈区，碳水化合物识别区是HIV的结合部位，颈区的重复序列变化可导致DC-SIGN空间结构变化，影响碳水化合物识别区与HIV-1gp120结合，继而Dc细胞就不能将HIV病毒颗粒传递给CD4+T细胞。鉴于DC-SIGN与HIV结合有赖于碳水化合物识别区结合位点，而结合能力则取决于颈区的重复序列，故理论上有可能通过外源性给予含碳水化合物识别区和颈区的DC-SIGN蛋白来封闭HIV-1gp120上的结合位点，或使用针对DC-SIGN的特异性抗体竞争结合树突状细胞表面的DS-SIGN，从而阻断HIV感染。
为此，本研究通过克隆人DC-SIGN基因片段，构建DC-SIGN家蚕表达系统，进行目的产物表达及生物活性分析，为制备完全人源抗DC-SIGN单链抗体及开发新的艾滋病防治产品奠定基础。
目的：克隆人DC-SIGN基因片段，构建DC-SIGN家蚕表达系统，进行目的产物表达、鉴定及生物活性分析。
方法：采用Fiocn密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞(PBMC)，加入rhGM-CSF、rhIL-4体外培养、刺激其分化为DC细胞；抽提DC细胞总RNA，RT-PCR扩增出DC-SIGN基因片段，通过TA克隆插入pMD18-TVector载体中，构建重组子pMD18-DC-SIGN；以pMD18-DC-SIGN为模板，重新设计引物扩增出带酶切位点的DC-SIGN片段，定向插入家蚕表达载体pBacPAK8中并转化大肠杆菌，用酶切鉴定，得到编码目的基因的重组质粒pBacPAK8-DC-SIGN，与线性化的Bm-BacPAK6病毒基因组DNA共转染家蚕细胞，经过体内重组，空斑筛选得到重组病毒Bm-BacPAK-DC-SIGN，PCR鉴定重组病毒Bm-BacPAK-DC-SIGN；将Bm-BacPAK-DC-SIGN感染家蚕细胞BmN表达目的产物，采用SDS-PAGE、Westernblot检测表达产物DC-SIGN蛋白片段；将家蚕细胞表达的目的产物与HIV-1包膜糖蛋白gp120蛋白孵育，以检测DC-SIGN蛋白片段的生物活性。
结果：
①成功克隆了正常人DC-SIGN基因片段；
②构建了稳定表达人DC-SIGN蛋白片段的家蚕杆状病毒载体表达系统；
③成功表达了DC-SIGN蛋白片段，其生物活性分析显示能够特异性地与HIV-1包膜糖蛋白gp120结合。
结论：成功地在家蚕杆状病毒载体表达系统中表达了正常人DC-SIGN蛋白片段，后者具有天然DC-SIGN蛋白样的生物活性，为其抗体制备及AIDS防治药物的研发奠定了基础。