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目的:观察食管癌中Skp2的表达特征,并探讨Ad-shSkp2转染食管癌细胞Eca109后,对其生物学特性的影响以及对食管癌体内及体外的抑制作用。方法:(1)24例食管癌切除手术患者的癌组织以及相应的癌旁正常组织,用免疫组织化学方法检测Skp2的表达情况。(2)利用Ad-shSkp2转染293细胞,扩增后,CsCl密度梯度纯化、离心以获得满足实验需要的Ad-shSkp2。(3)用Ad-shSkp2转染Eca109细胞后,通过荧光显微镜和免疫印迹试验(Western blot)来检测Skp2的表达,用CCK-8检测Ad-shSkp2对食管癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blot检测Bcl-2、Bax、PARP以及cleaved-PARP蛋白的表达。(4)利用腺病毒Ad-GFP-RFP-LC3转染Eca109细胞后,在荧光显微镜下观察并记录自噬的发生;以及通过Western blot检测LC3Ⅱ/Ⅰ的比值以及Beclin1的表达。(5)将Eca109细胞接种到裸鼠皮下,构建裸鼠移植瘤模型,分别将Ad-shSkp2、Ad-NC、PBS注射到裸鼠食管癌瘤体中,绘制裸鼠生长曲线,计算肿瘤生长抑制率。剥离瘤体,利用免疫组织化学方法检测各组瘤体中Skp2、PCNA的表达情况。结果:(1)Skp2在癌组织和癌旁组织中均有表达,且在癌组织中的表达率明显高于正常组织。(2)成功获得满足实验需要的Ad-shSkp2与Ad-NC。(3)AdshSkp2转染Eca109细胞后,显著降低了Skp2的表达,Ad-shSkp2转染Eca109细胞后,Eca109的增殖受到了抑制,PI(碘化丙啶)染色流式分析显示G2/M期阻滞以及G0/G1期出现一个明显的亚二倍体峰即凋亡峰。Western blot结果显示下调食管癌细胞中Skp2的表达后,降低了Bcl-2的表达,升高了Bax以及cleaved-PARP的表达。(4)荧光显微镜下观察到Ad-shSkp2作用于食管癌细胞后,诱导了了自噬的发生,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值以及Beclin1的表达均增加。(5)苏木精-伊红染色法(HE染色)证实了裸鼠瘤体确实为食管癌,成功构建人食管癌裸鼠移植瘤,Ad-shSkp2组肿瘤的生长明显受限,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中的Skp2以及PCNA的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Skp2在人类食管癌中高表达,沉默Skp2诱导了食管癌细胞Eca109凋亡与自噬的发生;不管在体内还是体外,沉默Skp2都对食管癌的生长有一定的抑制作用。