本实验室已构建了皮质抑素-乙肝表面抗原融合基因（S/CST14）和生长抑素-乙肝表面抗原融合基因（S/2SS）的双表达DNA疫苗pIRES-S/CST14-S/2SS,虽在小鼠上取得一定的增重效果,但由于所选载体pIRES的IRES元件下游基因的表达量仅为上游基因的20-50%,所以有必要尝试更好的载体构建策略或方法。本研究利用上述载体,将上、下游融合基因互换位置,构建双表达质粒pIRES-S/2SS-S/CST14,并肌注免疫小鼠,旨在从免疫应答、促生长作用和安全性等方面比较其效果,并探究最佳免疫剂量。主要研究内容和结果如下:1.新型疫苗的构建将PCR扩增获得的S/2SS片段和S/CST14片段分别插入到载体pIRES的MCS A和MCS B位点,构建pIRES-S/2SS’和pIRES-S/CST14’两种单表达质粒及pIRES-S/2SS-S/CST14双表达质粒,双酶切和测序结果证明三种质粒构建成功。2.新型疫苗的鉴定分别将这三种质粒转染Hela细胞,RT-PCR检测S/2SS和S/CST14基因的结果显示,三种质粒在真核细胞中均能正常转录,Western Blot结果表明,三种质粒在真核细胞中均能相应地高效表达S/2SS和S/CST14融合蛋白。3.新型疫苗免疫小鼠的最佳剂量及效果评价为探究新型双表达DNA疫苗pIRES-S/2SS-S/CST14的最佳免疫剂量,本研究设计低（5μg）、中（10μg）、高（20μg）三种剂量肌注免疫4周龄昆明雌鼠,间隔2周加免一次,结果表明,试验组均诱导小鼠产生了强烈的免疫应答,且抗体水平和阳性率随免疫时间的延长呈现下降趋势,中剂量组（10μg）的抗体水平、抗体阳性鼠的体增重和GH水平要明显优于其它两组,免疫效果没有呈剂量依赖关系。为探究新型双表达DNA疫苗的免疫与增重效果,本研究设计同一剂量（10μg）的不同疫苗（pIRES-S/2SS-S/CST14新型疫苗组、SS单表达疫苗组、CST单表达疫苗组、单表达疫苗联合免疫组、pIRES-S/CST14-S/2SS阳性对照组、pIRES空载组和生理盐水组）肌注免疫4周龄昆明雌鼠,间隔2周加免一次,结果表明,与其它试验组相比,两个双表达疫苗组诱导了更高的免疫应答并取得了更好的体增重,且新型双表达疫苗pIRES-S/2SS-S/CST14的免疫效果略优于原疫苗pIRES-S/CST14-S/2SS,抗体阳性鼠体增重比空载组增加了16.35%。为探讨抗体水平与体增重、GH水平之间的关系,本研究统计免疫组（所有免疫组合并）抗体阳性小鼠（血浆中至少一种抗体呈阳性）、免疫组抗体阴性小鼠（血浆中两种抗体均呈阴性）和对照组小鼠（包括空载组和生理盐水组）的抗SS抗体水平、抗CST抗体水平、总增重和GH水平,结果显示,免疫组抗体阳性鼠的抗体水平显著高于免疫组抗体阴性鼠和对照组小鼠（P＜0.05）,总增重和GH水平也为各组最高,免疫组抗体阴性鼠的抗体水平和总增重较对照组有所增加,但差异不显著,GH水平和对照组相当,提示可能只有抗体水平达到一定程度,才能促进GH的分泌进而促进动物生长。4.新型疫苗对小鼠卵巢增重的影响首次免疫8周后采集小鼠的卵巢称重,结果显示,各试验组抗体阳性鼠的卵巢重较对照组基本都有所增加,中剂量新型疫苗组的卵巢重显著高于对照组（P＜0.05）,提示生长抑素基因疫苗可能影响动物的生殖性能。5.新型疫苗的安全性评价首次免疫8周后,采集pIRES-S/2SS-S/CST新型疫苗组小鼠的心、肝、脾、肺、肾、小肠、卵巢、大脑和注射部位肌肉9个组织,PCR方法检测未发现质粒与基因组DNA整合,制作石蜡切片未观察到任何组织病变,提示新型双表达疫苗是相对安全的。