山楂叶提取物为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge. var. major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶经加工制成的提取物,是我国的传统中药,其主要成分为黄酮类成分对心血管系统有明显的药理作用。本文对山楂叶提取物中总黄酮类成分进行分离纯化,并且制备了两个高纯度黄酮单体化合物作为标准品使用,将山楂叶总黄酮(HLF)制成微粒型黏附制剂,主要解决黄酮苷类化合物粘膜通透性差、在胃肠道的变化和菌群代谢、胃,肝和肠的“首过”作用影响口服吸收等问题。本文首先建立了HLF的薄层色谱和高效液相的定性定量质量控制方法。以总黄酮的含量和转移率为指标,考察影响聚酰胺树脂对HLF的动静态吸附的浓度、pH、流速等因素,得出了纯化HLF的最佳工艺,对山楂叶提取物进行聚酰胺柱层析分离纯化,最终分离物中总黄酮的含量在90%以上。采用制备型高效液相色谱法,从HLF中分离制备了纯度大于99%的的牡荆素鼠李糖苷(VO R)和牡荆素葡萄糖苷(VOG),作为HLF及其相关制品的质量控制研究的标准品使用。处方前研究表明,HLF溶解于水,由于分子结构中具有酚羟基存在,在不同pH缓冲液中的饱和溶解度随pH值增加而略有增加,其表观油水分配系数在不同pH下均较低,说明其亲脂性弱,不易被肠道吸收,随着pH值的增加,HLF的表观油水分配系数减小。在胃肠道中的稳定性结果表明,在酸性较强时不稳定,在pH4.0-7.6之间较稳定。VOG和VOR在胃内容物溶液中不稳定,剩余药物浓度百分比随时间变化先增加再减少；在结肠降解最为明显,孵育2h降解药物超过10%,而其他肠段在4h内基本稳定。离体大鼠的胃和肠段对HLF物理吸附、代谢和摄取的实验结果表明,大鼠的胃对各组分无显著性物理吸附,有一定的摄取(离体吸收),有明显的代谢；肠粘膜、肠壁则无明显的吸附、摄取和代谢。建立了同时测定血浆中VOG和VOR的UPLC-MS/MS方法,该法专属性强,灵敏度高,分析时间短。通过不同途径给药得出的药代动力学参数,考察药物口服吸收过程中各部位对生物利用度的影响。HLF口服给药后,VOG和VOR药时曲线呈现多峰现象(四峰),与成分间的转化,肠肝循环以及胃肠的多部位吸收有关。HLF十二指肠给药后,在1h内出现最大的血药浓度峰,之后同口服给药一样,药物缓慢吸收,并在6h和12h处再达到峰值。结果表明：VOG在肝、肠和胃中的利用度分别为63.41%、5.25%和63.86%；VOR在肝、肠和胃中的的利用度分别为64.62%、6.99%和75.34%。可知,虽然胃和肝的“首过”作用导致部分药物被清除,但相比之下,肠道的药物利用度低是影响HLF口服吸收的关键因素。建立适用于HLF吸收研究的肠袢模型,系统地研究了HLF主要组分的吸收和黏附材料对吸收的影响。研究结果表明,HLF的主要活性组分VOG和VOR在大鼠肠道的吸收转化随剂量增加而增加,吸收过程伴随着肠道菌群代谢,胆汁排泄、肠道分泌和肠肝循环现象。并且筛选出可以增加VOG和VOR吸收的生物粘附性聚合物,海藻酸钠(AN),卡波姆934(CBM)和羧化壳聚糖(CPCTS)有显著的促吸收效果。以微粒的外观、粒径、包封率和收率为评价指标,对HLF黏附微粒的制备过程进行了研究。采用液中干燥法制备黏附微粒,分别单因素考察了工艺和处方因素对微粒粉体学性质、释放度和粘附性的影响。工艺因素中搅拌速度主要影响微粒的粒径,包封率和收率；溶剂挥发温度是制备微粒的关键因素,影响微粒的所有性质；溶剂挥发时间主要影响微粒中药物释放。处方因素中分散相和分散介质的体积比对微粒的所有性质均有影响；药物与辅料的投料比与微粒的包封率和释放度有着直接的关系；乳化剂用量影响微粒的粒径、收率和释放度。应用优选处方和工艺制备三批样品并对粉体学性质、粘附性及释放度进行测定。结果表明,黏附微粒圆整、表面光滑；平均粒径在1-200μm范围内；休止角θ<30°,流动性很好；有一定的吸湿性和粘附性；山楂叶总黄酮卡波姆黏附微粒(HLF-CBM-BP).山楂叶总黄酮羧化壳聚糖黏附微粒(HLF-CPCTS-BP)和山楂叶总黄酮海藻酸钠黏附微粒(HLF-AN-BP)的包封率分别为73.23%,75.15%和81.79%。对益心酮滴丸(HLF-pills)和山楂叶总黄酮黏附微粒分别进行了Beagle犬体内药动学研究。结果表明：VOG和VOR在Beagle犬体内药动学特征比较复杂,VOG和VOR的药时曲线均呈现多峰现象,与HLF口服给药体内药代动力学特征一致,二者体内药动学特征比较相似(P>0.05)。分别单剂量口服给药HLF-CBM-BP、HLF-CPCTS-BP和HLF-AN-BP的AUC0-∞和Cmax与HLF-pills的比较有显著提高(P<0.05),HLF-CBM-BP组VOG和VOR的MRT0-∞分别是HLF-pills组的1.57和1.71倍。受试制剂组的表观分布容积和清除率也比HLF-pills组的小。根据非隔室模型中的数据,以HLF-pills作为参比制剂,计算HLF-CBM-BP组、HLF-CPCTS-BP组和HLF-AN-BP组的相对生物利用度(Fr),VOG的Fr分别是200.98%、157.82%和169.82%,VOR的Fr分别是233.97%、184.66%和173.35%。粘附微粒延长药物在肠道的滞留时间,有利于吸收,增加药物的生物利用度。本文研究表明山楂叶总黄酮黏附微粒可紧密的粘附在组织粘膜表面从而提高其生物利用度,使其性质稳定,希望能为HLF制备高效、长效剂型提供科学依据。