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目的：通过体外细胞实验，检测顺铂（cisdiamminodichloroplatinumⅡdichloride，cisplatin，DDP）干预人肺腺癌A549细胞后细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）、磷酸化细胞外信号调节激酶（phospho-extracellular signal-regulated kinase，p-ERK）、程序性死亡配体1（Programmed death ligand-1，PD-L1）的表达，从而探究DDP对人肺腺癌A549细胞PD-L1表达的影响及其可能的机制，为DDP联合免疫治疗提供理论基础。
方法：1.CCK-8法分别检测不同浓度DDP（0mg/L、0.5mg/L、1mg/L，2mg/L、4mg/L、8mg/L）干预A549细胞不同时间（24h、36h、48h）后的光密度（optical density，OD）值，并分别计算其增殖抑制率及半数抑制浓度（50%maximal inhibitory concentration，IC50），选择最适时间48h的及最适IC50值用于后续实验；2.流式细胞术检测PD-L1的表达，分组：为检测不同浓度DDP对PD-L1的影响，分为不同浓度组（0、0.5、1、2、4、8）mg/L的DDP，为探究ERK通路抑制剂PD98059对人肺腺癌A549细胞PD-L1的影响，分为对照组、DDP组、PD98059组、DDP联合PD98059组，对照组加入培养液，DDP组加入IC50浓度的DDP、PD98059组加入20umol/LPD98059、DDP联合PD98059组加入20umol/L的PD98059及IC50浓度的DDP，分别干预48h，用流式细胞术检测其PD-L1的表达；3.蛋白免疫印迹杂交法（Western Blot）检测各组细胞中ERK、p-ERK表达水平：根据前期实验结果分为对照组、DDP组、PD98059组、DDP联合PD98059组，干预48h后用Western Blot法分别检测各组细胞中ERK、p-ERK蛋白表达水平，并比较各组之间ERK、p-ERK表达的差异。
结果：1.不同浓度（0mg/L、0.5mg/L、1mg/L，2mg/L、4mg/L、8mg/L）DDP干预A549细胞，24h细胞增殖抑制率分别为：0%、（2.684±0.995）%、（5.614±1.229）%、（18.989±2.062）%、（24.256±2.828）%、（39.83±2.969）%，各组间对比差异具有统计学意义（P<0.05），36h增殖抑制率分别为：0%、（4.373±1.296）%、（8.855±2.355）%、（23.88±3.057）%、（39.995±3.365）%、（54.19±2.6）%，各组间对比差异具有统计学意义（P<0.05），48h增殖抑制率分别为：0%、（5.082±2.793）%、（10.019±3.77）%、（30.426±2.533）%、（56.189±3.165）%、（75.522±4.216）%，各组间对比差异具有统计学意义（P<0.05），不同时间点之间对比，除DDP0mg/L组外，各实验组的增殖抑制率差异具有统计学差异（P<0.05）。经计算后得到DDP干预24h、36h、48h的IC50值为分别为：11.244mg/L、6.247mg/L、3.586mg/L，选择48小时及3.586mg/L作为最适干预时间和最适干预IC50用于后续实验；2.不同浓度组（0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L、8mg/L）DDP作用于A549细胞48h后PD-L1阳性细胞表达率分别为：（39.87±1）%、（42.77±0.85）%、（51.87±2.05）%、（62.03±1.31）%、（70.47±0.21）%、（75.8±1.85）%，各组间对比均有统计学意义(P<0.05)。对照组、DDP组、PD98059组、DDP+PD98059组干预A549细胞48h后PD-L1阳性细胞表达率分别为：（40.23±2.07）%、（67.07±1.31）%、（38.77±1.69）%、（52.57±1.01）%，与对照组相比，DDP组、DDP+PD98059组的PD-L1表达增加，差异均具有统计学意义（P<0.05），PD98059单药组与对照组相比无统学意义（P>0.05）；DDP+PD98059组较DDP组的PD-L1的表达降低，较PD98059组的PD-L1表达增加（P<0.05）。3.对照组、DDP组、PD98059组、DDP+PD98059组各组之间的ERK相对蛋白表达分别为：1.26±0.13、1.27±0.16、1.27±0.12、1.28±0.14，各组之间无统计学差异（P>0.05），各组p-ERK相对蛋白表达分别为：0.29±0.02、0.74±0.02、0.23±0.02、0.49±0.05；与对照组比较，DDP组、DDP联合PD98059组的p-ERK上调，PD98059组的p-ERK下调（P＜0.05）；DDP联合PD98059组较DDP组的p-ERK下调，但较PD98059组的p-ERK上调（P<0.05）。
结论：1.顺铂对A549细胞的增殖抑制作用在一定范围内呈时间剂量依赖性；2.顺铂上调人肺腺癌A549细胞株PD-L1的表达在一定范围内呈浓度依赖性；3.顺铂可以通过激活ERK通路上调人肺腺癌A549细胞株PD-L1表达。
方法：1.CCK-8法分别检测不同浓度DDP（0mg/L、0.5mg/L、1mg/L，2mg/L、4mg/L、8mg/L）干预A549细胞不同时间（24h、36h、48h）后的光密度（optical density，OD）值，并分别计算其增殖抑制率及半数抑制浓度（50%maximal inhibitory concentration，IC50），选择最适时间48h的及最适IC50值用于后续实验；2.流式细胞术检测PD-L1的表达，分组：为检测不同浓度DDP对PD-L1的影响，分为不同浓度组（0、0.5、1、2、4、8）mg/L的DDP，为探究ERK通路抑制剂PD98059对人肺腺癌A549细胞PD-L1的影响，分为对照组、DDP组、PD98059组、DDP联合PD98059组，对照组加入培养液，DDP组加入IC50浓度的DDP、PD98059组加入20umol/LPD98059、DDP联合PD98059组加入20umol/L的PD98059及IC50浓度的DDP，分别干预48h，用流式细胞术检测其PD-L1的表达；3.蛋白免疫印迹杂交法（Western Blot）检测各组细胞中ERK、p-ERK表达水平：根据前期实验结果分为对照组、DDP组、PD98059组、DDP联合PD98059组，干预48h后用Western Blot法分别检测各组细胞中ERK、p-ERK蛋白表达水平，并比较各组之间ERK、p-ERK表达的差异。
结果：1.不同浓度（0mg/L、0.5mg/L、1mg/L，2mg/L、4mg/L、8mg/L）DDP干预A549细胞，24h细胞增殖抑制率分别为：0%、（2.684±0.995）%、（5.614±1.229）%、（18.989±2.062）%、（24.256±2.828）%、（39.83±2.969）%，各组间对比差异具有统计学意义（P<0.05），36h增殖抑制率分别为：0%、（4.373±1.296）%、（8.855±2.355）%、（23.88±3.057）%、（39.995±3.365）%、（54.19±2.6）%，各组间对比差异具有统计学意义（P<0.05），48h增殖抑制率分别为：0%、（5.082±2.793）%、（10.019±3.77）%、（30.426±2.533）%、（56.189±3.165）%、（75.522±4.216）%，各组间对比差异具有统计学意义（P<0.05），不同时间点之间对比，除DDP0mg/L组外，各实验组的增殖抑制率差异具有统计学差异（P<0.05）。经计算后得到DDP干预24h、36h、48h的IC50值为分别为：11.244mg/L、6.247mg/L、3.586mg/L，选择48小时及3.586mg/L作为最适干预时间和最适干预IC50用于后续实验；2.不同浓度组（0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L、8mg/L）DDP作用于A549细胞48h后PD-L1阳性细胞表达率分别为：（39.87±1）%、（42.77±0.85）%、（51.87±2.05）%、（62.03±1.31）%、（70.47±0.21）%、（75.8±1.85）%，各组间对比均有统计学意义(P<0.05)。对照组、DDP组、PD98059组、DDP+PD98059组干预A549细胞48h后PD-L1阳性细胞表达率分别为：（40.23±2.07）%、（67.07±1.31）%、（38.77±1.69）%、（52.57±1.01）%，与对照组相比，DDP组、DDP+PD98059组的PD-L1表达增加，差异均具有统计学意义（P<0.05），PD98059单药组与对照组相比无统学意义（P>0.05）；DDP+PD98059组较DDP组的PD-L1的表达降低，较PD98059组的PD-L1表达增加（P<0.05）。3.对照组、DDP组、PD98059组、DDP+PD98059组各组之间的ERK相对蛋白表达分别为：1.26±0.13、1.27±0.16、1.27±0.12、1.28±0.14，各组之间无统计学差异（P>0.05），各组p-ERK相对蛋白表达分别为：0.29±0.02、0.74±0.02、0.23±0.02、0.49±0.05；与对照组比较，DDP组、DDP联合PD98059组的p-ERK上调，PD98059组的p-ERK下调（P＜0.05）；DDP联合PD98059组较DDP组的p-ERK下调，但较PD98059组的p-ERK上调（P<0.05）。
结论：1.顺铂对A549细胞的增殖抑制作用在一定范围内呈时间剂量依赖性；2.顺铂上调人肺腺癌A549细胞株PD-L1的表达在一定范围内呈浓度依赖性；3.顺铂可以通过激活ERK通路上调人肺腺癌A549细胞株PD-L1表达。