论文部分内容阅读
为研究蓝塘猪和长白猪骨骼肌卫星细胞在增殖和分化过程中的差异,本试验通过选取上市体重的蓝塘猪和长白猪以及1日龄的蓝塘和长白仔猪作为动物模型,利用Real time PCR法研究上市体重的蓝塘猪和长白猪背最长肌、半腱肌和半膜肌生肌调控因子(MyoD、Myf5、Myogenin和MRF4),Myostatin和Pax7 mRNA表达丰度的品种间差异;通过原代培养获得1日龄的蓝塘猪和长白猪骨骼肌卫星细胞,应用细胞计数法、MTT法、流式细胞仪周期分析法、Real time PCR和Western Blot对卫星细胞的增殖和分化等生物学特性进行分析。
结果表明:
(1)在上市体重的蓝塘猪和长白猪肌肉中,蓝塘猪背最长肌MRF4 mRNA丰度显著高于长白猪(P<0.05),而在两品种猪半膜肌中的表达差异不显著(P>0.05);长白猪半膜肌中MymRNA丰度显著高于蓝塘猪(P<0.05),而在两品种猪背最长肌中的表达无显著性差异(P>0.05);长白猪背最长肌和半膜肌中MyoD、Myostatin和Pax7mRNA丰度均显著高于蓝塘猪(P<0.05);长白猪背最长肌、半腱肌和半膜肌中Myogenin mRNA丰度均高于蓝塘猪,但差异不显著(P>0.05);上述基因在半腱肌中的表达均不存在品种间差异(P>0.05)。
(2)1日龄蓝塘猪背最长肌、半腱肌和半膜肌的肌纤维数目均显著高于长白猪(P<0.05);而蓝塘猪背最长肌、半腱肌和半膜肌的肌纤维横截面积则显著低于长白猪(P<0.05)。
(3)蓝塘猪骨骼肌卫星细胞的细胞数目在增殖72h时显著高于长白猪(P<0.05);而在其他时间点中,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞的细胞数目均高于长白猪,但差异不显著(P>0.05)。在细胞增殖第72h时,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞在细胞周期中S期和G2/M期卫星细胞数目均显著高于长白猪(P<0.05)。在增殖第72h时,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞中MyoD、Myf5、Myogenin和Pax7 mRNA丰度均显著高于长白猪(P<0.05);而Myostatin及其下游基因Smad3 mRNA丰度在则显著地低于长白猪(P<0.05)。在蛋白水平的研究中,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞MyoD和Myogenin的表达均显著高于长白猪(P<0.05);而Myostatin蛋白的表达则显著低于长白猪(P<0.05)。
(4)用2%马血清诱导分化24h后,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞开始形成肌管;而长白猪骨骼肌卫星细胞则没有这种现象。在蓝塘猪骨骼肌卫星细胞中,MyoD、Myf5、Myogenin和Pax7 mRNA丰度均显著高于长白猪(P<0.05);而Myostatin mRNA丰度则显著低于长白猪(P<0.05)。在蛋白水平的研究中,Myogenin蛋白在蓝塘猪骨骼肌卫星细胞中的表达均显著高于长白猪(P<0.05);而Myostatin蛋白的表达则显著低于长白猪(P<0.05)。
以上结果提示,蓝塘猪和长白猪骨骼肌卫星细胞在增殖分化初期均表现出差异。与长白猪骨骼肌卫星细胞相比,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞的增殖能力较好且更容易趋向于分化。