利用表面增强拉曼光谱无标记分析抗生素、氨基酸等生物分子

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常见的抗生素、氨基酸和维生素药物在发挥其功能作用的同时仍然会存留于人体体液中,这对人体的健康具有较大的影响。因此,开发一种有效的检测分析手段对于这些药物的合理使用具有较大的帮助作用。表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman Scattering,SERS)拥有灵敏度高、选择性强、不易被干扰和非破坏性等众多优势,被广泛应用于生物分析、材料检测和医疗治疗等领域。本文通过不同种还原剂还原的金属银纳米颗粒(Ag NPs)作为增强基底,以钙离子(Ca2+)作为聚集剂,二氯甲烷(DCM)作为内标,实现了对抗生素、氨基酸以及维生素等生物分子在水溶液以及人体体液中的无标记检测与分析。详细的工作如下:(1)以经典的柠檬酸钠(SSC)还原的Ag NPs为基底,使用溴离子(Br-)和Ca2+来改善Ag NPs的表面状态,消除柠檬酸根离子信号的干扰,Ca2+作为聚集剂诱导Ag NPs形成“热点”,以容纳抗生素分子的进入,实现抗生素分子的高灵敏度检测。通过DCM作为内标,首次提出了使用峰强度的变化来区分不同的抗生素分子,并表征这些抗生素分子的结构和性质的变化。对水溶液以及人体血清中抗生素混合物的含量进行了量化分析,获得了抗生素浓度与峰强度之间良好的线性关系。此外,也成功地检测了人血清中低浓度抗生素分子的拉曼信号,莫西沙星在人血清中的检测限(LOD)和量限(LOQ)分别低至50 ng/m L和100 ng/m L。(2)以过量的硼氢化钠(SBH)作为还原剂,防止Ag NPs的表面被Ag O包覆,从而使氨基酸分子能够到达银纳米基底的表面。利用Ca2+作为银纳米基底的聚集剂,成功实现了多种非芳香族氨基酸的无标记精确指纹测定。以DCM作为内标,首次提出以峰强度的变化区分不同种氨基酸分子,并探究了混合物中氨基酸浓度变化情况。与此同时,进一步分析了三种多肽的理化性质和氨基酸形成肽链的形成过程。检测了体液(血清、唾液和尿液)中低浓度氨基酸的拉曼信号,血清、唾液和尿液中酪氨酸(Tyr)的LOD为10μg/m L,5μg/m L和0.05μg/m L。血清、唾液和尿液中苯丙氨酸(Phe)的LOD为20μg/m L,5μg/m L和5μg/m L。所提出的方法可以潜在地应用于蛋白质测序。(3)改变SBH作为还原剂还原银纳米颗粒的配比,制备了最有效的增强维生素拉曼信号的SERS基底,探究了不同种金属阳离子聚集剂对纳米颗粒的聚集效果和增强效果的对比,实现了六种B族维生素的无标记检测和分析。以两种维生素的混合定量证明了目前方法具有的极高灵敏度和稳定性。检测了血清和尿液中低浓度的维生素B2的拉曼信号,血清中维生素B2的LOD为0.5μg/m L,尿液中维生素B2的LOD为0.05μg/m L。通过目前的技术手段,可以实现对人体体液中残留的三种生物分子(抗生素、氨基酸和维生素)的无标记检测与定量分析,这对这三种生物分子的临床检测具有潜在的应用价值。
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