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犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种肿瘤性疾病。目前,乳腺癌一直以外科手术治疗为主,并出现了扩大根治和超根治术,但并未能明显提高远期生存率。随着现代科技的发展,光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)成为治疗恶性肿瘤研究的新领域,其作用因素有光敏剂、光以及氧分子。光敏剂可以被病变靶组织选择性的吸收,在合适波长的光的激发下,通过能量的转换产生活性氧物质,进而造成对靶组织的损伤,是一种非常有发展前景的能诱导细胞凋亡和坏死的肿瘤治疗方法。血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)是一种新型的卟啉类光敏剂,并已在基础实验和临床试验中证明了它的高效性。但目前国内外HMME-PDT对犬乳腺癌细胞作用研究较少。本课题采用这种新型光敏剂血卟啉单甲醚,用波长为632.8nm的He-Ne激光照射犬乳腺肿瘤细胞系,探讨其对犬乳腺肿瘤细胞抑制的机理,为光动力学对肿瘤疾病的治疗提供理论依据。实验选用从自然发生乳腺肿瘤病例的转移病灶分离培养的细胞系,常规传代培养,取对数生长期的细胞按分组:空白对照组、单独激光组、单独光敏剂组和实验组(激光照光+光敏剂)对体外培养的犬乳腺癌细胞株CHMm进行HMME-PDT实验,用MTT法检测其光密度值OD490,观察不同实验条件PDT对犬乳腺癌细胞在体外的抑制作用,绘制其抑制率曲线;然后苔盼蓝拒染检测细胞的死亡率;用Hochest33258染色和电泳技术检测细胞凋亡情况;用流式胞仪术检测细胞周期;用比色法检测MDA、NO的含量和SOD、GSH-PX的活性;用放免法检测IL-2和IL-6的含量。实验结果:空白对照组、单独光敏剂组(HMME20μg/mL)及单独激光组(2.8J/cm2)对细胞增殖均无明显影响,而HMME-PDT(HMME20μg/mL+2.8J/cm2)组处理后细胞增殖明显受到抑制,因此说明HMME-PDT作用对体外培养的犬乳腺癌细胞株CHMm的生长有明显抑制作用,在一定范围内,光动力效应与光敏剂浓度和光照剂量均呈相关关系;HMME-PDT处理后用Hochest33258染色、彗星电泳图片可见,细胞产生了明显的凋亡现象,而且随着时间延长,凋亡更加明显;细胞周期各时间点G0/G1期比例增加在12、24、48h与对照组比较差异极显著(P<0.01),而S期和G2/M期比例降低在24、48h与对照组比较以有极显著差异(P<0.01),都呈时间依赖性变化,但是S和G2/M变化不如G0/G1明显,说明HMME-PDT的抑癌作用机理与细胞周期调控相关,具体表现在HMME-PDT可诱导CHMm细胞产生G0/G1细胞周期阻滞;MDA、NO的含量增加和SOD、GSH-PX的活性降低除0h外,其余时间点与对照组比较有极显著差异性(P<0.01),这一结果说明HMME-PDT通过打破细胞内氧化还原平衡,增加细胞内自由基的含量来杀伤犬乳腺肿瘤细胞;IL-2含量升高、IL-6的含量降低分别与对照组比较有极显著差异(P<0.01),表明IL-2、IL-6参与了HMME-PDT对细胞体外杀伤的发生过程。