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研究背景和目的 横行腹直肌皮瓣（TRAM皮瓣）广泛应用于软组织的修复再造中，尤其在乳房再造方面起重要作用。缺血所致皮瓣部分坏死高发生率是有待解决的难题。许多学者通过各种手术方法、物理方法及药物提高TRAM皮瓣的血供以减少坏死发生。治疗性的血管生成在许多缺血性疾病中研究的较多，其中VEGF促血管生成作用的研究是最令人关注的项目。基因治疗是一种非常有前景的治疗手段，已经证明在动物的心肌缺血和下肢缺血模型中VEGF基因可促进血管形成，改善血流动力学，增加缺血区血供。在皮瓣移植实验中也证明将人VEGF基因注射到皮瓣的供血血管内，结果使皮瓣成活面积增大。但总的来说，基因治疗在缺血皮瓣方面的研究仍较少。 本研究的目的：（一）建立稳定的大鼠缺血TRAM皮瓣模型。（二）研究重组人VEGF基因直接皮下注射对TRAM皮瓣成活及皮下微血管密度的影响，为缺血皮瓣的基因治疗提供实验依据。（三）研究重组人VEGF基因直接皮下注射后，VEGF表达水平与皮瓣成活及皮下微血管密度的相关性。研究方法2001年浙江大学硕士学位论文1、质粒抽提：将转染目的质粒的细菌扩增后，碱法大量抽提。2、TRAM皮瓣模型：采用单侧腹壁下动脉为蒂的下位横行腹直肌皮瓣。3、给药方式：32只动物随机分4组，每组8只，药物分四点注射于皮瓣区腹直肌蒂两侧。实验组术前5天给药每只500tyPCDNAVEGF；阳性对照组术时给药每只100ngVEGF 空白对照组术前5天给药每只lml生理盐水；阴性对照组术前5天给药每只500ngCDNA。术后一周荧光素钠测试皮瓣血运，照相输入电脑，用计算机图象处理软件AUt。CAD计算成活面积。4、PcDNAVEGF注射前，注射后卜3、5、7、9天的血清标本，用ELLISA试剂盒测定血中VEGF水平。5、PCDNAVEGF下腹部注射后5天的注射区皮肤切片，采用链霉卵白素——过氧化物酶复合物（SP）免疫组化法测定VEGF表达。6、微血管计数：各组皮瓣 HE染色的切片皮下组织中每 mm’的微血管数结果1、TRAM皮瓣模型成活面积：3．61士 1刀6cm‘。2、各组皮瓣成活面积：生理盐水组皮瓣成活面积 4＊ 士1．77 Cm’，PcDNA组皮瓣成活面积4．22士1．80Cffi’，pCDNAVEGF组皮瓣成活面积7．gS士2．64 Cm’，VEGF组皮瓣成活面积 7．31士1．22 cm‘。PcDNAVEGF组皮瓣成活面积显著高于生理盐水组 （P＜0．01）及PCDNA组（P＜0．01），VEGF组皮瓣成活面积显著高于生理盐水组 （P＜0．05）。3、血中VEGF水平：注射PCDNAVEGF前、注射后1、3、5、7、9大的血中VEGF浓度无显著差异。4、切片微血管密度：生理盐水组 44．56i7．S7根／mm‘，PcDNA组 37．49i3．34根／mm‘，pCDNAVEGF组58．71士8．ZS根／mm’，VEGF组65．61士14．29根／mm‘。12001年浙江大学硕土学位论文D PCDNAVEGF组及 VEGF组微血管密度显著高于生理盐水组（P＜0．05），PCDNAVEGFl 组微血管密度也显著高于PcDNA组。15、兔疫组化：PcDNAVEGF注射区皮肤中，棕褐色的抗原抗体复合物沉积在小血D 管内皮细胞浆及淋巳管内皮细胞浆内，有时可呈带状围绕血管腔，在未注射区D 未发现类似的情况。J、直接下腹部皮下注射的 PCDNAVEGF可在大鼠下腹部皮肤内表达具生物活性的IVEGF。12、直接皮下注射 PCDNAVEGF可促进皮下微血管形成。13、直接皮下注射 PCDNAVEGF可提高缺血 TRAM皮瓣成活面积，在缺血皮瓣的预D 防性治疗方面起到一定的积极作用。