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目的: 应用实时荧光定量PCR和免疫组化方法分别检测肝细胞肝癌及正常肝细胞组织中SALL4 mRNA的相对表达量和蛋白表达情况;结合病理分级，探讨SALL4mRNA相对表达量与肝癌分化等级的关系;探讨SALL4在肝癌诊断中的价值。 方法: 1.病例资料和病例标本收集:收集2012年6月以后肝癌病理石蜡切片，分别来自浙江大学医学院附属一院、浙江省肿瘤医院、嘉兴一院、武警浙江总队医院，病理确诊的各期肝癌111例，以及非肝癌肝细胞组织石蜡切片10例;切片后，二张玻片用于免疫组化，其余装入离心管用于RNA提取。 2.组织RNA提取:采用德国Qiagen公司的RNeasy FFPE Kit进行组织总RNA的抽提，流程:蛋白酶K裂解消化、热处理、结合总RNA到RNeasy MinElute柱、洗脱、上清液、分离相、RNA沉淀、RNA洗涤和RNA溶解。用Thermo Nano Drop2000分光光度计（美国Thermo公司）对总RNA浓度及纯度进行检测。 3.cDNA的合成:采用美国Thermo(ThermoScientific)公司的ThermoScientific RevertAid First Strand cDNA synthesis Kit试剂盒及ThermoScientificRevertAid First Strand cDNA synthesis Kit的特异性引物miRNA-specific RT primer进行逆转录过程，将上述总RNA逆转录成cDNA，用定性PCR仪进行逆转录反应过程，逆转录后的产物可直接用于PCR扩增过程或4℃保存。 4.SALL4 mRNA检测:采用美国Biotium公司Fast-Plus EvaGreen(@) qPCR mastermix试剂盒检测肝组织标本中SALL4的mRNA表达水平，每个样本做3个重复，GAPDH同样，扩增过程用瑞士罗氏公司的LightCycler(@)480Ⅱ型实时荧光定量PCR仪进行，扩增循环参数如下:98℃，2min;98℃，10s，60℃，20s，72℃，30s，72℃，一共40个循环，72℃，2min，4℃，永久。计算检测样本SALL4 Ct值/GAPDH CT值，根据各样本SALL4和所对应GAPDH的Ct值，采用相对定量方法计算，采用2-△CT的计算法表示结果，△Ct=CtSALL4mRNA-CtGAPDH mRNA。 5.免疫组化染色及结果判断:通过脱蜡、水化;封闭内源性过氧化酶;高压灭菌法抗原修复;封闭特异性蛋白;SALL4一抗37℃孵化2～3小时;二抗室温孵化10～30分钟;DBA显色;再与苏木精复染、脱水、透明、封片;然后通过光学显微镜检查组织石蜡标本切片后进行免疫组织化学染色，根据阳性细胞百分率及染色深浅对染色结果进行判断，分析时将-判为阴性表达，+、++和+++判为阳性表达。 6.统计学分析:用SPSS19.0软件对数据进行统计学分析，不同肝组织类型SALL4的表达差异用完全随机设计两样本比较的Mann-Whitney U检验;肝癌组中不同病理分级间的差异用Kruskal-Wallis秩和检验，两个率或两个构成比比较用卡方检验，均设P＜0.05为差异有统计学意义。 结果: 1.肝组织中SALL4 mRNA的表达情况:(1)肝细胞肝癌组织中SALL4表达阳性率为:54.95％(61/111)，肝正常组织SALL4表达阳性率为0％(0/10);与肝正常组织SALL4无表达相比，肝细胞肝癌组织中SALL4 mRNA的相对表达量均值为2-△Ct=2.75×10-4，其表达水平显著高于正常肝细胞组织。(2)肝细胞肝癌组织中SALL4 mRNA表达水平与性别、年龄、肿瘤大小、AFP差异均无显著性，而与病理分级有关（P＜0.05）。 2.肝组织中SALL4蛋白表达情况:免疫组化法检测111例肝癌组织和10例正常肝细胞组织SALL4蛋白的表达情况，肝癌组织阳性表达率36.9％(41/111)，正常组织阳性表达率0％(0/10)，肝癌组织中蛋白的表达比正常组织有明显增加，差异有统计学意义(x2=4.060，P＜0.05)。 3.诊断价值:(1)在肝癌诊断中对SALL4进行效能评估，发现SALL4对于肝细胞肝癌诊断的灵敏度为55.0％，特异性达到100.0％，阳性预测值为100.0％;曲线下面积ROC-AUC=0.77。在肝组织中的诊断灵敏度高于甲胎蛋白(55.0％vs35.1％);(2)联合检测SALL4及AFP对患者诊断的预测:准确度从SALL4的58.7％、AFP的40.5％提高到71.5％;敏感性从SALL4的55.0％、AFP的35.1％提高到68.5％。 4.RNA提取浓度测定:所有样品A260/A280在1.8～2.0之间，RNA纯度较高，无DNA、蛋白质等污染。 结论: 与肝正常组织相比，SALL4在肝癌中的mRNA和蛋白表达水平明显上调。SALL4对于肝细胞肝癌诊断的特异性为100.0％，阳性预测值为100.0％，是有价值的肝癌生物学行为标记物，且在肝组织中的诊断灵敏度高于甲胎蛋白，诊断的准确度较甲胎蛋白略高;联合检测SALL4 mRNA及血清AFP对患者诊断的预测:准确度从SALL4 mRNA的58.7％、AFP的40.5％提高到71.5％;敏感性从SALL4的55.0％、AFP的35.1％提高到68.5％。