目的：课题组的研究已经证实sonic hedgehog(Shh)通路激活促进心肌梗死(MI)修复，其中保护受损的心肌细胞是其机制之一，但是具体的保护机制不清楚。已知自噬能促进心梗心肌细胞的存活。因此建立体外心肌细胞氧葡萄糖剥夺（OGD）模型模拟体内心肌缺血，探讨自噬是否参与Shh通路对糖氧剥夺心肌细胞损伤的保护作用，而且AMPK通路是否介导其中。　　方法：对H9C2心肌细胞采用氧葡萄糖剥夺（OGD）方式模拟体内心肌缺血的模型。正常培养细胞70％左右，对H9C2心肌细胞用无FBS的培养基进行同步化12小时后，弃去旧培养基，换上2%FBS的培养基让细胞适应3小时，再给予细胞不同药物作用12小时，然后对细胞使用无糖培养基并在三气培养箱（氮气：二氧化碳：氧气=94:5:1）中缺氧培养，即为糖氧剥夺处理，采用MTT法检测细胞活力，TUNEL法和流式细胞技术法进行凋亡细胞的检测，MDC法检测自噬小泡的表达情况，western blot法检测自噬相关蛋白LC3等的表达情况，Co-IP法检测磷酸化AMPK/Ulk1555的结合情况。　　结果：　　1、氧葡萄糖剥夺时间依赖性地降低H9C2心肌细胞活性并激活自噬。氧葡萄糖剥夺处理1h活细胞比率与空白对照组比较开始下降。氧葡萄糖剥夺处理2、4h组活细胞比率依次下降。氧葡萄糖剥夺处理4h组与空白对照组比较LC3蛋白表达水平升高。　　2、Shh通路激活提高OGD心肌细胞的存活并促进其自噬增加。H9C2心肌细胞给予SAG2?M预处理后进行氧葡萄糖剥夺处理1h和4 h，与OGD组比较，SAG2M组活细胞比率明显增加；LC3蛋白表达明显增加；自噬小泡表达明显增加，另外，在OGD1h中，单纯chloroquine组和单纯bafilomycin A1组分别与SAG+chloroquine组和SAG+bafilomycin A1组比较，后者的LC3蛋白表达水平明显升高。　　3、抑制自噬削弱Shh通路对OGD心肌细胞的保护作用。与SAG组比较，SAG+3-MA组自噬相关蛋白LC3表达水平明显降低。MDC法检测自噬小泡的结果和MTT法检测细胞活性的结果与western blot结果趋势基本一致。　　4、抑制自噬削弱Shh通路对OGD心肌细胞凋亡的抑制作用。流式细胞技术法检测凋亡结果显示，与OGD1h组相比较，OGD4h组的凋亡明显增加。与SAG组比较，3-MA组的凋亡明显增加。TUNEL法检测的结果与流式细胞技术结果基本一致。　　5、激动Shh通路增加AMPK磷酸化及促进Ulk磷酸化。SAG2?M组磷酸化AMPK明显增加；SAG能够诱导自噬激活因子Ulk1555的磷酸化，但是对mTORC1的亚基Raptor、m TOR下游p70 S6K和其下游自噬抑制因子Ulk1757没有影响。Co-IP的结果进一步显示在心肌细胞中Shh通路的激活能促进磷酸化AMPK和Ulk1的结合。　　6、给予AMPK抑制剂减弱Shh通路激活引起的自噬增加及其对OGD心肌细胞的保护作用。采用Western Blot检测自噬相关蛋白LC3，与SAG2?M组比较，SAG+Compound C组的LC3有明显的下降。采用MDC法检测自噬小泡的结果和采用MTT法检测细胞存活率与western blot的结果趋势相一致。　　小结:　　1.激动Shh通路促进OGD心肌细胞自噬增加。　　2.抑制自噬削弱Shh通路对OGD心肌细胞损伤的保护作用。　　3. Shh通路通过直接促进磷酸化AMPK/Ulk1结合诱导自噬增加，给予AMPK抑制剂削弱Shh通路对OGD心肌细胞损伤的保护作用。　　结论:本研究采用OGD模型模拟体内心肌缺血探讨Shh通路激活保护心肌细胞受损的机制。综上所述，本研究结果证明Shh通路通过激活AMPK通路诱导自噬增加，对OGD心肌细胞损伤发挥保护作用。