论文部分内容阅读
背景:成体神经发生是通过再生治疗人类中枢神经系统(CNS)疾病的重要过程,它通过招募成体神经干细胞(NSCs)这一过程来完成。NSCs具有产生星形胶质细胞、神经元及少突胶质细胞的能力。为了弄清参与成体神经发生过程中的调控因素,对于临床治疗应用具有重要的启发作用。这里我们报道BAF45D和GFAP在成年脊髓中央管(CC)中的共表达,而且通过定量数据分析,发现了BAF45D优先表达于成体中枢神经系统中的神经元。此外,PAX6是神经外胚层分化的一项决定因素,而P19细胞在神经外胚层分化过程中,BAF45D参与PAX6的表达。总的来说,我们的研究可能为BAF45D在成体神经元区的表达和对早期神经发展的作用提供一个新的视野。目的:主要研究方面:1):BAF45D在成体神经源区的表达;2):BAF45D和NEUN、BAF45D和GFAP、BAF45D和BETA-III-tubulin在成鼠脊髓中的共表达;3):探讨BAF45D蛋白,在维甲酸(RA)体外诱导P19胚胎癌细胞向神经元样细胞分化过程中的作用及其变化;方法:1):选用C57/BL6成年小鼠(10-12周,体重25-30g)制备脊髓横断面切片,并采用免疫组织化学技术(IHC)和免疫组织荧光技术(IF)检测BAF45D、NEUN、GFAP、BETA-III-tubulin蛋白在脊髓中的表达;2):选用维甲酸(RA 1μM)诱导鼠P19细胞向神经方向的分化,并且利用免疫印迹法(IB)技术检测BAF45D、OCT4、NESTIN和PAX6的表达情况;3):制备成鼠脊髓和海马组织的蛋白悬液,并运用免疫印迹法(IB)检测BAF45D、NEUN、GFAP、GAPDH的表达;结果:1):BAF45D在成鼠脊髓的非室管膜细胞核中,和中央管室管膜细胞核中均可以阳性表达;2):GFAP在细胞突起中的强表达,且BAF45D和GFAP可共表达在同一细胞中;3):BAF45D可在NEUN、BBETA-III-tubulin标志的神经元中的表达,且BETA-III-tubulin和BAF45D共表达在细胞质中;4):GFAP同时在脊髓灰质和白质中表达,而BAF45D和BETA-III-tubulin主要表达在灰质中;5):在RA诱导P19细胞的第5天时,光镜下观察细胞的形态,大部分都伸出突起样结构。而无RA诱导的P19细胞,维持原先细胞形态;6):在RA的诱导过程中,神经元特异性标志物Nestin随着诱导的时间延长,表达量也逐渐增加,说明了RA可以有效刺激P19细胞向神经细胞方向的分化;7):在RA诱导P19神经分化的过程中,Pax6在早期呈现出逐渐增加的趋势,在第四天达到高峰状态,随后其表达量又逐渐降低;OCT4的表达水平逐渐降低,可呈时间依赖性;BAF45D的表达量在逐渐增加,可呈时间依赖性;8):GFAP在脊髓中的表达明显多于海马;BAF45D和NEUN在海马中的表达稍多于脊髓;结论:1):BAF45D在成年鼠脊髓的中央管室管膜细胞中表达;2):BAF45D优先表达在成年鼠脊髓中的成熟神经元;3):维甲酸(RA)能成功的诱导P19细胞向神经方向的分化,而且分化过程中PAX6的产生与BAF45D是有一定联系的;