【摘 要】
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基质金属蛋白酶（MMPs）及其抑制剂（TIMPs）在许多生理和病理过程中发挥重要调控作用。已有研究证明MMPs的SNP位点与畜禽的生长、繁殖、肉质、脂肪沉积以及抗病等性状均存在显著关联。本课题组前期对MMPs家族的几个成员进行了研究,发现MMP-1/3/9/11/13在鸡卵巢卵泡发育及排卵过程发挥作用。基质金属蛋白酶-10（MMP-10）,也称为基质溶素-2,是一种锌依赖性内肽酶。作为一种基质降解
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基质金属蛋白酶（MMPs）及其抑制剂（TIMPs）在许多生理和病理过程中发挥重要调控作用。已有研究证明MMPs的SNP位点与畜禽的生长、繁殖、肉质、脂肪沉积以及抗病等性状均存在显著关联。本课题组前期对MMPs家族的几个成员进行了研究,发现MMP-1/3/9/11/13在鸡卵巢卵泡发育及排卵过程发挥作用。基质金属蛋白酶-10（MMP-10）,也称为基质溶素-2,是一种锌依赖性内肽酶。作为一种基质降解酶,MMP-10通过消化III型和V型胶原蛋白,弹性蛋白,纤连蛋白等各种细胞外基质成分参与组织重塑。本研究旨在进一步探明鸡MMP-10基因的组织表达特征及其多态性分布。具体研究内容如下:（1）分析了鸡MMP-10基因的组织表达特征。q PCR方法检测MMP-10基因在鸡心、肝、脾、胸肌、卵巢中的表达,结果表明MMP-10在5种组织中均有表达,但在脾中表达最高,胸肌最低;在等级卵泡中的表达高于等级前卵泡,等级卵泡中F1表达最高（P=0.001）。（2）重测序方法筛选鸡MMP-10全基因范围内的SNPs位点。随机选取济宁百日鸡、孙枝鸡和沂蒙鸡各30个个体进行全基因组重测序（测序深度为11.2×）,筛选MMP-10 TSS上游3,082 bp到3′UTR区域内的SNPs,发现一共存在48个SNPs位点。其中外显子包含7个（1个为错义突变,6个为同义突变）,发生错义突变的位点蛋白质二级结构也发生了变化。（3）双荧光素酶报告基因方法鉴定鸡MMP-10基因启动子区活性及SNPs位点。扩增MMP-10基因TSS上游3,082 bp片段,构建启动子区不同片段长度的删除载体,双荧光素酶报告基因活性检测方法分析MMP-10基因5′调控区的转录调控机制,发现-3,082 bp～-1,623 bp为关键启动子区,在此区域内筛选到4个SNPs位点,分别为g.-3,038 T＞C、g.-2,593 T＞C、g.-2,463 T＞C和g.-2,319 A＞G。进一步利用一代测序技术在不同品种中对g.-2,593 T＞C、g.-2,463 T＞C和g.-2,319 A＞G进行分析,证实重测序得到的SNPs在不同品种中均存在。（4）分析了鸡MMP-10基因关键启动子区SNPs位点的等位基因及基因型频率在群体中的分布特征。将关键启动子区4个SNPs位点在济宁百日鸡、孙枝鸡和沂蒙鸡中的基因型频率和等位基因频率进行群体遗传学分析,发现这4个位点的等位基因分布全部处于哈代温伯格平衡,g.-3038在三个品种中优势等位基因均为T,其他三个位点在不同品种中优势等位基因存在差异。（5）本课题组前期发现MMP-11/13启动子区SNPs与产蛋性状存在显著关联,本研究将52周产蛋数、最大连产和开产日龄性状均差别较大的济宁百日鸡个体分为两个极端表型组,分别计算基因型频率,通过卡方检验发现4个位点在性状差异群体中的基因型分布不存在显著差异。
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