论文部分内容阅读
同种异体骨髓移植(Allo-BMT)技术在近二三十年得到飞速发展,为一系列造血系统或非造血系统疾病的患者提供了新的希望。Allo-BMT的最大局限在于供受者之间HLA不合程度增高,移植物抗宿主病(GVHD)的风险增大,受者移植后的无病存活率受到影响。其中急性移植物抗宿主病(aGVHD)是移植早期死亡的主要原因,而慢性移植物抗宿主病(cGVHD)则降低了受者的生存质量和长期生存率。组织配型技术的提高以及多种免疫抑制剂的联合应用,使Allo-BMT后GVHD的发生率明显降低。环孢菌素A(CSA)联合短程氨甲喋呤(MTX)作为aGVHD的标准预防方案,在临床上推广应用,大大降低了aGVHD的发生率和严重程度。即便如此,在HLA主要位点完全相合的Allo-BMT,aGVHD的发生率可达30%-60%,由其直接或间接引起的死亡占BMT后死亡率的50%左右。因此,预防和治疗aGVHD成为提高同种异体骨髓移植(Allo-BMT)成功率的关键。 霉酚酸酯(MMF)是霉酚酯酸(MPA)的酯类前体,MPA选择性抑制次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)。该酶是鸟嘌呤核苷酸经典合成途径中的限速酶。IMPDH受抑导致鸟嘌呤核苷酸生成减少,进而DNA、RNA合成受阻。MPA对鸟嘌呤核苷酸合成的另一途径,即补救合成途径没有影响。中性粒细胞可同时通过补救途径,合成鸟嘌呤核苷酸,而T、B淋巴细胞则更依赖于经典途径合成,故MPA对淋巴细胞的嘌呤合成具有选择性抑制作用。MMF在人类实体脏器移植抗排斥方面有独特的功效,1995年美国FDA批准MMF应用于临床肾移植抗排异治疗,证明MMF较传统硫唑嘌呤治疗有明显的优越性。MMF用于预防和治疗异基因骨髓移植中急性GVHD,在国际是仅见数篇报道。本单位黄河等从1998年开始在非亲缘异基因骨髓移植在应用MMF联合CSA、MTX预防aGThD,取得良好效果。但MMF在aGVHD动物模型中的作用及机理研究至今罕见报道。本研究目的在于建立小鼠异基因骨髓移植-急性移植物抗宿主病动物模型,观察霉酚酸酯(MMF)以及不同的联合用药方案(MMF+CSA+MTX,CSA+MTX)对aGVHD的预防作用,并进一步探讨MMF预防aGVHD的可能作用机制,为临床应用提供实验依据。第一部分: 霉酚酸酯(MMF)对小鼠异基因骨髓移植中急性移植物抗宿主炳 *cvnn)的预防作用目的:探讨新型免疫抑制剂一霉酚酸酯(MMF)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防作用。方法:建立主要组织相容性抗原(MHC)完全不合的两个纯种近交系小鼠悦鼠:C57BL/6)(H/X雌性;受鼠:BALB/C(HPX雄性]异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病bllo书MT伯)动物模型。根据 aGVHD的发生强度分:小鼠中度 aGVHD模型(A型,移植小鼠的平均生存时间为刀天):小鼠重度*GVH D模型旧型,移植小鼠的平均生存时间为 6天)。分组:AI组(6只),MMF(30mg/kg/d);AZ组(6 .q),CSA+MTX;A3组(6只),MMF(30mg/kg/d)联合 CSA+MTX;A4组(6只),对照组,移植后未用 aGVHD预防方案山 组(9只),MMF(30mg/kg/d)旧 组(9 .q),CSA+MTX;m组(9只),**F(3om叭咖)联合mA十*TX;M组(9只),**F(朋m咖叩)联合 CSA+MTX;BS组(9 .q),MMF(10ng/kg/d)联合 CSA+MTX;B6对照组(9只),移植后未用 aGWID预防方案。以小鼠 aGVHD症状,移植小鼠中位生存时间(MST)、生存率(+35天)、外周血象的恢复情况,以及GVHD病理分级作为钾价指标。结果:在小鼠中度aGVHD移植模型中,移植小鼠于2周后,逐渐出现消瘦、反应迟钝、脱毛、腹泻、耳廓充血增厚、双眼分泌物增多(结膜炎)等aGVHD症状,不用aGVllD预防方案的移植小鼠(A4组),则aGVHD持续发展,死亡率达100%,MST为ZI天。AI-A3组小鼠经单用或联用MMF、CSA、MTX等免疫抑制剂后,在不同程度上减轻甚至防止了aGVHD的发生,在移植后+35天,小鼠的生存率分别为50%、50%、33%从3组的生存率较川人 组低,但差异无显著性(P>oj)5)。 3在小鼠重度aGVHD移植模型中,移植小鼠于+3-+5天即出现少食少动、消瘦、腹泻、弓背体位、毛发紊乱无光泽等aGVHD症状,不用aGVHD预防方案的移植小鼠旧6组)死广高峰在+5/7天,死亡率达 100%。应用 ,删P预防方案的 BIE组小鼠aGVHD程度明显减轻,表现为消瘦、腹泻、腹胀、脱毛、耳廓增厚充血。双眼分泌物增多(结膜炎)等aGVHD症状,MST较B6组显著延长(分别延长3.4天,丑4无,9刀天,6.1天,吕.瑟天,P<0.05)。m-扔组的*盯较*组显著延长(P<O.oj);B3E 组的MST较BZ组稍延长,但无显著性差异;B3、BS组的MST较B4组延长,差异有显著性(P<0.05);m组与m组的*盯无显著性差异。外周血象变化:发生重度 aGVHD的移植小鼠旧6组),MST仅为 6天,故观察不到其血象回升过程。中度和重度aGVHD应用预防案组的移植小鼠(AI.A3,BI.5组),+5天左右白细胞开始?