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补体系统是古老的防御系统,是机体固有免疫的重要组成部分。无论是经典途径、旁路途径或是凝集素途径的补体分子活化,均可通过补体的末端效应序列组装成膜攻击复合体(MAC),MAC为中空的C9聚合体,含有MACPF结构域,其插入病原体的脂质双层膜,造成病原体死亡,这是机体防御机制中最有效的一环。至今为止,七鳃鳗中未有类似高等脊椎动物C9同源分子的报道。因此,本论文基于雷氏七鳃鳗基因组数据鉴定含有MACPF结构域的基因、解析脊椎动物c9基因的进化过程并揭示含有MACPF结构域基因参与免疫应答的效应。
1.从雷氏七鳃鳗基因组数据库中鉴定到5个含有MACPF结构域的基因,将其命名为L-brinp、L-gvin1a、L-gvin1b、L-gvin1c和L-astn2。对脊椎动物含有MACPF结构域的基因构建系统发育树和分析结构域的组成、motif、同源序列比对及共线性,结果表明mpeg1为脊椎动物含有MACPF结构域基因的原始祖先,从而进化出脊椎动物中与免疫和生长发育相关的众多含有MACPF结构域的基因。
2.明确脊椎动物c9基因的进化过程,研究发现C9中的一些结构域分别与brinp、fi和fp基因中的结构域同源,而且这些结构域的边界刚好对应外显子与内含子的边界。因此,在进化中,brinp、fi和fp基因中的个别外显子通过外显子重排机制很可能参与了C9基因的组成。
3.明确七鳃鳗含有MACPF结构域基因在不同组织中的表达模式。L-brinp和L-astn2仅在七鳃鳗脑中表达,与高等脊椎动物的brinp和astn在神经系统中特异性表达的现象一致;L-gvin1c在七鳃鳗的各个组织中均有很高的表达量。利用qPCR的方法检测七鳃鳗经不同刺激后L-brinp和L-gvin1c表达量的变化。结果显示在鳗弧菌和病毒刺激后,L-brinp和L-gvin1c均有明显上调的情况,并且L-brinp与Drbrinp1和Drbrinp3a.1的表达模式一致。
4.高内涵的结果显示重组七鳃鳗BRINP蛋白并不能够对MCF-7细胞起到杀伤作用。MTT、CCK8和双荧光素酶报告基因的结果表明,过表达七鳃鳗的BRINP蛋白对于哺乳动物细胞活性无显著影响,证明七鳃鳗的BRINP与高等脊椎动物的BRINP功能存在一定差异。进一步分析发现,七鳃鳗中含有MACPF结构域的基因缺少行使成孔功能的氨基酸序列。
本文鉴定七鳃鳗中含有MACPF结构域的基因,探究每个基因的结构特点及进化规律,其中基于外显子重排形成新基因的机制明确脊椎动物c9基因的起源进化过程。此外,对于七鳃鳗含有MACPF结构域基因的生物学功能进行初探,证明这些基因在七鳃鳗的免疫防御中起到重要作用,为深入解析高等脊椎动物基因的起源进化与功能分化提供可靠依据。
1.从雷氏七鳃鳗基因组数据库中鉴定到5个含有MACPF结构域的基因,将其命名为L-brinp、L-gvin1a、L-gvin1b、L-gvin1c和L-astn2。对脊椎动物含有MACPF结构域的基因构建系统发育树和分析结构域的组成、motif、同源序列比对及共线性,结果表明mpeg1为脊椎动物含有MACPF结构域基因的原始祖先,从而进化出脊椎动物中与免疫和生长发育相关的众多含有MACPF结构域的基因。
2.明确脊椎动物c9基因的进化过程,研究发现C9中的一些结构域分别与brinp、fi和fp基因中的结构域同源,而且这些结构域的边界刚好对应外显子与内含子的边界。因此,在进化中,brinp、fi和fp基因中的个别外显子通过外显子重排机制很可能参与了C9基因的组成。
3.明确七鳃鳗含有MACPF结构域基因在不同组织中的表达模式。L-brinp和L-astn2仅在七鳃鳗脑中表达,与高等脊椎动物的brinp和astn在神经系统中特异性表达的现象一致;L-gvin1c在七鳃鳗的各个组织中均有很高的表达量。利用qPCR的方法检测七鳃鳗经不同刺激后L-brinp和L-gvin1c表达量的变化。结果显示在鳗弧菌和病毒刺激后,L-brinp和L-gvin1c均有明显上调的情况,并且L-brinp与Drbrinp1和Drbrinp3a.1的表达模式一致。
4.高内涵的结果显示重组七鳃鳗BRINP蛋白并不能够对MCF-7细胞起到杀伤作用。MTT、CCK8和双荧光素酶报告基因的结果表明,过表达七鳃鳗的BRINP蛋白对于哺乳动物细胞活性无显著影响,证明七鳃鳗的BRINP与高等脊椎动物的BRINP功能存在一定差异。进一步分析发现,七鳃鳗中含有MACPF结构域的基因缺少行使成孔功能的氨基酸序列。
本文鉴定七鳃鳗中含有MACPF结构域的基因,探究每个基因的结构特点及进化规律,其中基于外显子重排形成新基因的机制明确脊椎动物c9基因的起源进化过程。此外,对于七鳃鳗含有MACPF结构域基因的生物学功能进行初探,证明这些基因在七鳃鳗的免疫防御中起到重要作用,为深入解析高等脊椎动物基因的起源进化与功能分化提供可靠依据。