【摘 要】
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该文选择人神经营养因子-3(hNT-3)设计和开展了两部分工作:第一部分,将hNT-3 CDNA全长片段构建到真核表达载体pcDNA3中,经脂质体介导的转染分别在哺乳动物细胞系COS-7和CHO中
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该文选择人神经营养因子-3(hNT-3)设计和开展了两部分工作:第一部分,将hNT-3 CDNA全长片段构建到真核表达载体pcDNA3中,经脂质体介导的转染分别在哺乳动物细胞系COS-7和CHO中获得了瞬时表达和稳定表达;建立了大乳鼠背根神经节生物活性测定方法,检测到瞬时和稳定细胞表达产物具有明显促进大乳鼠背根神经节神经突起生长的生物活性;建立了ELISA方法检测hNT-3细胞表达水平.证实了哺乳动物细胞系可以稳定、有效地表达具有高生物活性的NT-3.第二部分,将hNT-3cDNA全长片构建到逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒经包装细胞PA317包装,可以产生具有一次感染能力的重组逆转录病毒 ;在对10个重组产病毒馐细胞株进行病毒滴度测定之后,选择了一株高滴度的产病毒细胞株广大培养,建立了原始细胞库;用该细胞株的含病毒培养上清液感染大鼠原代成纤维细胞,获理整合有外源基因的工程细胞,经Western Blotting和生物活性检测.建立了NT-3基因治疗体外途径的技术平台,为进一步应用NT-3对神经系统病症进行基因治疗打下了基础.
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