目的:2018年WHO的报告表明全球约有4.66亿听力障碍患者。内耳功能异常引起的感音神经性耳聋约占患者人数的90%。遗传因素、老龄化、噪音损害和耳毒性药物的损伤引起的内耳听觉功能异常感音神经性听力损失的主要原因。氨基糖苷类抗生素因其低廉的价格和良好的疗效,在某些疾病临床治疗上成为最常用的一类药物,但由于其导致的氧自由基的积累和对听觉毛细胞凋亡的诱导,这类抗生素具有明确的耳毒性副作用。我们尝试寻找一种能减少或阻止氨基糖苷类抗生素对内耳听觉毛细胞损伤的药物,并进一步探究其作用机制,为药物性耳聋的治疗提供一种可行的思路。方法:本研究选择小分子药物Blebbistatin作为研究对象,氨基糖苷类抗生素选择临床与基础研究中较常用的新霉素进行实验。首先在HEI-OC-1类毛细胞及小鼠内耳毛细胞组织培养模型中,加入了0.5 mM新霉素损伤建立损伤模型,通过CCK-8实验、死活染色、细胞计数等方法探究了Blebbistatin是否能提高氨基糖苷类抗生素诱导后细胞的存活率,并探究Blebbistatin在该损伤模型中最适宜的保护浓度,并以此浓度作为标准进行随后的实验。同样在HEI-OC-1类毛细胞系及小鼠内耳毛细胞的损伤模型中,通过细胞流式分析技术、qPCR检测及免疫荧光染色技术,验证Blebbistatin是否通过抑制细胞凋亡的方式,提高氨基糖苷类抗生素诱导后细胞的存活率。随后通过相同的方法探究Blebbistatin对氨基糖苷类抗生素诱导后HEI-OC-1类毛细胞系及小鼠内耳毛细胞损伤模型中的线粒体膜电位、活性氧的累积以及突触结构的影响。结果:在新霉素暴露后,Blebbistatin可以减少新霉素诱导的两种损伤模型中毛细胞的凋亡,且这种效果在一定剂量范围内,与Blebbistatin的浓度呈正相关。随后的实验结果表明,Blebbistatin维持两种损伤模型中氧化基因和抗氧化基因表达的平衡,稳定了HEI-OC-1类毛细胞和内耳毛细胞的线粒体功能,从而减少了细胞中活性氧的积累,由此抑制了新霉素所诱导的HEI-OC-1类毛细胞及内耳毛细胞的凋亡。同时Blebbistatin维持了毛细胞与螺旋神经元之间的突触结构的完整性,为毛细胞与螺旋神经元之间的通讯提供了必要前提条件。结论:Blebbistatin可以提高新霉素诱导损伤后听觉毛细胞的存活率,其通过保护线粒体功能,减少活性氧积累的方式减少细胞凋亡,作用方式适用于大部分药物毒副作用导致的听力损伤模型中。这些结果表明,Blebbistatin可能在预防氨基糖苷类药物引起的内耳毛细胞损失和药物性耳聋的治疗及预防方面具有潜在的临床应用价值。