血红栓菌培养基的筛选及发酵液多糖体外抗肿瘤作用的研究

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血红栓菌作为一种研究较少的药用真菌,但在民间记载中具有较好的药理价值,为开发利用这一资源,对血红栓菌的生物学特性进行了研究,结果表明:菌丝体生长的最佳碳源为蔗糖;最佳氮源为蛋白胨;在同时添加MgSO4和KH2PO4两种无机盐时菌丝体生长情况最好;碳氮比为20/1时菌丝体长势最好;不添加维生素时菌丝体生长情况最佳;经正交试验结果确定菌丝体生长的最佳固体培养基为:蔗糖2%,蛋白胨0.5%,硫酸镁0.05%,磷酸二氢钾0.2%,琼脂2%。   因为本实验室主要是运用真菌多糖进行药理方面的研究,因此筛选出一种能够产糖多的液体深层培养基至关重要。因此对血红栓菌最佳的液体深层培养基进行了筛选。采用热水浸提法,以发酵全液的粗多糖得率作为参考指标,通过单因素试验和正交试验,对血红栓菌菌丝体多糖发酵条件进行优化。结果表明,血红栓菌菌丝体多糖发酵的最佳培养基为蔗糖3%,黄豆粉1%,硫酸镁0.1%,磷酸二氢钾0.1%。同时对影响血红栓菌深层发酵多糖产量的环境条件进行了筛选,最后结果表明:在500mL的锥形瓶中装液量为150mL,接种量为10%时的多糖产量最高,为最适反应条件。   将血红栓菌进行发酵后,将发酵全液分为发酵液和菌丝体两部分,将发酵液100℃提取醇沉得到醇沉多糖XYC和醇溶组分XYR;将分离得到的菌丝体分成三部分,分别进行碱提、水提和酸提后经醇沉分别得到碱提醇沉组分XJC、水提醇沉组分XSC和酸提醇沉组分SSC。上述醇沉组分中含有多糖、蛋白质、色素和小分子等多种物质。为了得到较为单一的多糖样品,对粗提物进行了初步纯化和分级纯化,使用sevege法为血红栓菌粗提物除蛋白方法,使用双氧水法除色素,利用透析袋除去小分子物质,样品冷冻干燥,最终得到经初步纯化的血红栓菌多糖。利用葡聚糖凝胶G-200柱层析,对样品进行分级纯化得到血红栓菌精多糖组分。   对血红栓菌多糖进行了体外的抗肿瘤试验,研究结果表明,血红栓菌多糖在体外对肿瘤具有抑制活性,但它们的抑制作用差别很大,有的还会对肿瘤细胞具有促进增殖的作用。
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