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目的:以SD大鼠四氯化碳中毒性肝纤维化模型为研究对象,了解肝组织RECK基因、基质金属蛋白酶-2的活性在肝纤维化发展及逆转过程中的动态变化,揭示RECK基因表达与肝纤维化程度以及与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性之间的相关性。
方法:SD雄性成年大鼠(重量为140±10g)65只随机分为A,B两组:A组5只为肝纤维化对照组,每周2次纯花生油皮下注射,剂量为3 m1·kg-1,于第8周末处死。B组60只为肝纤维化组,用CCl4皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,每周2次用50%CCl4油溶液皮下注射,剂量为3 ml·kg-1,并于第1、2、4、6、8周末分别处死4只动物,留取肝组织备用。B组剩余40只随机分为C、D两组:C组20只为肝纤维化进展组,继续行相同剂量的50%CCl4油溶液皮下注射,仍然是每周两次:D组20只为肝纤维化自然逆转组,停用CCl4,改为每周2次纯花生油皮下注射,剂量为3 ml.kg-1。在实验8周后第2、7、14、28天两组各处死5只动物,并留取肝组织备用。处死时测量肝重指数(即肝重/体重比值),肝组织常规HE染色检测造模是否成功以及判断脂肪变性的程度,天狼猩红染色判断肝纤维化程度,明胶酶谱法检测肝组织MMP-2的活性,RT-PCR法检测RECK基因mRNA表达水平,免疫组织化学染色了解肝组织RECK蛋白表达情况。
结果:①在大鼠肝纤维化形成的早期和中期,肝脂肪变性逐渐加重,肝重指数逐渐升高;晚期逐渐减轻或下降;肝纤维化逆转过程中肝脂肪变性减轻、肝重指数下降更加明显。②在肝纤维化发展过程中,肝组织RECK表达随肝纤维化程度的加重而逐渐下降,MMP-2活性逐渐升高;逆转过程中,RECK表达水平逐渐升高,MMP-2活性逐渐下降。③RECK表达水平和肝纤维化程度呈负相关(r=-0.56931,P<0.05),而MMP-2活性与纤维化程度呈正相关(r=0.93715,P<0.05)。④不论是在肝纤维化发展阶段还是在逆转过程中,RECK表达水平和MMP-2活性均呈负相关(形成过程中r=-0.69034,P<0.05;进展利逆转过程中r=-0.97234,P<0.05)。
结论:在大鼠肝纤维化形成和进展过程中,RECK表达逐渐下降而逆转时表达升高,提示该基因活动受抑可能是肝纤维化形成的原因之一;RECK基因表达和MMP-2活性呈负相关,提示前者对后者可能起到抑制作用。