IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是一种常见的原发性肾小球肾炎疾病，占肾活检患者的30%~45%，其特征是肾小球系膜区以IgA为主的免疫复合物沉积。临床表现多种多样，主要表现为血尿，可伴有不同程度的蛋白尿、高血压和肾功能受损。IgAN致病机制与多种因素有关，但具体的致病机制尚未阐明。定量蛋白组学(Quantitative proteomics)发现了多种潜在的蛋白标志物，但仍未有IgAN特异性的蛋白标志物。目前IgAN蛋白磷酸化研究较少，本研究采用定量蛋白组学和磷酸化蛋白组学(Phosphoproteomics)分析IgAN肾组织，揭示与IgAN相关的蛋白和IgAN肾组织的磷酸化修饰特征。
　　目的：
　　从蛋白组学水平筛选IgAN发病相关的蛋白；对IgA肾组织蛋白进行磷酸化位点分析，预测修饰位点上游激酶，构建激酶-蛋白网络图，揭示IgAN磷酸化特征，为IgAN分子诊断标志物及发病机制研究提供新的依据。
　　方法：
　　本研究疾病组为确诊的IgAN患者（n=7例），对照组为确诊的轻度肾小球异常患者(Minor glomerularabnormalities,MGA)（n=10例）。首先，提取疾病组和对照组肾组织的蛋白，BCA试剂盒检测蛋白质的浓度。其次，采用胰蛋白酶将蛋白酶解成肽段，肽段用于定量蛋白组学和蛋白磷酸化组学分析。运用现代生物信息的方法分析数据，对差异表达的蛋白进行蛋白注释、GO、KEGG及结构域等功能富集分析。MCODE和CytoHubba筛选与IgAN相关的差异蛋白和差异磷酸化蛋白。iGPS1.0软件对磷酸化位点上游激酶预测，筛选疾病组和对照组中差异表达的激酶。
　　结果：
　　1蛋白组学
　　（1）本研究共鉴定到蛋白4360个，其中2894个具有定量信息。筛选到上调蛋白227个（＞2倍），下调蛋白263个（＜1/2倍）。
　　（2）对蛋白进行注释，发现差异蛋白主要分布在细胞质中，共146个。
　　（3）对蛋白进行功能富集分析。GO富集在细胞外基质和免疫系统发育及离子运输等生物功能中；KEGG富集在原发性免疫缺陷和氨基酸代谢等信号通路；结构域富集在C型凝集素折叠和金属硫蛋白结构域。
　　（4）由MCODE和CytoHubba筛选出6种可能与IgAN相关的核糖体蛋白：核糖体蛋白L23(RPL23)、核糖体蛋白L11(RPL11)、核糖体蛋白S15A(RPS15A)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白L13(RPS13)、核糖体蛋白S8(RPS8)。
　　2磷酸化蛋白组学
　　（1）本研究共鉴定到279个差异磷酸化蛋白，其中上调磷酸化蛋白99个（＞2倍）和下调磷酸化蛋白180个（＜1/2倍）。
　　（2）对磷酸化蛋白进行注释，发现磷酸化修饰蛋白主要分布在核中，共126个。
　　（3）对磷酸化蛋白进行功能富集分析。GO富集在锚定接点、肌动蛋白结合等多项功能中；KEGG富集在HIF-1信号通路和PI3K-Akt信号通路等多条信号通路；结构域富集在锌指，LIM型结构域。
　　（4）对磷酸化位点上游激酶进行预测，鉴定到225个激酶，其中65激酶处于激活状态，160个激酶处于抑制状态。
　　（5）筛选CDK2,CDK5,CK2A1,CK2A2,ERK1及ERK2激酶构建激酶-磷酸化位点网络图。结合MCODE和CytoHubba分析筛选出6个与IgAN相关的磷酸化蛋白，如桩蛋白(PXN)，核糖体蛋白S3(RPS3)，核糖体蛋白S27(RPS27)，黏着斑蛋白(VCL)，嗜热菌蛋白酶(TLN)及热休克蛋白AA1(HSP90AA1)等磷酸化蛋白。
　　结论：
　　（1）定量蛋白组学筛选到227个上调蛋白和263个下调蛋白。筛选出RPL23,RPL11,RPS15A,RPL32,RPS13和RPS8可能与IgAN发病机制相关的蛋白。
　　（2）磷酸化蛋白组学筛选到99个上调蛋白180个下调蛋白。
　　（3）筛选出PXN,RPS3,RPS27,VCL,TLN和HSP90AA1等磷酸化蛋白可能与IgAN发病机制相关。
　　（4）本研究筛选出来的蛋白和磷酸化蛋白可作为IgAN潜在分子标记物，为阐明IgAN发病机制提供新思路。