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植物的根系位于地下,起到锚定植株、吸收和运输土壤中的水分及营养等重要功能。根在地下部分的作用决定着地上部分的生长。位于根分生组织区的静止中心(Quiescent center;QC)在根生长发育过程中起着不可或缺的作用。静止中心被不同类型的干细胞所包围,这些干细胞通过分裂特化成根的不同区域的组织细胞。而静止中心和其周围的干细胞形成的干细胞小生境通过多种模式调控根的生长发育。干细胞小生境的调控主要由转录因子、植物激素以及染色质因子等因素构成。 生长素促进受体蛋白TIR1与转录抑制蛋白AUX/IAA结合,解除原本与AUX/IAA蛋白结合的生长素响应蛋白ARFs,进而启动ARFs的表达。静止中心位置生长素浓度最高,高浓度的生长素会使AUX/IAA蛋白降解。axr3-1是野生型AXR3的一个突变体,其翻译蛋白趋于稳定,从而减少生长素响应基因的转录进而抑制生长素反应。 本研究采用正向遗传学方法,以转基因拟南芥SCRGVG UAS::axr3-1为原材料来进行 EMS诱变。该转基因系统的工作原理是,通过外源施加激素DEX诱导GVG/UAS系统启动axr3-1在静止中心表达,导致静止中心发生分裂。通过构建EMS突变体库,筛选出表型回复家系,找到相关基因,揭示其对静止中心处于静止状态所起的作用及生长素信号对其调控的机理,进而为研究干细胞小生境的调控机制研究提供新材料。 目前研究的主要结果如下: 1、通过外源施加不同浓度DEX处理转基因拟南芥材料 SCRGVG UAS::axr3-1验证axr3-1在静止中心的诱导表达对静止中心静止状态的影响。结果表明5μM DEX处理7天的幼苗静止中心分裂及主根根长表型优于其他浓度,确定该条件为EMS突变体库的筛选条件。 2、构建EMS突变体库,得到2616份M2代候选突变体家系。 3、通过外源施加DEX对M2代种子进行初筛。以主根长度、静止中心所在区域GFP表达范围强弱为指标,筛选得到43个候选家系。再以静止中心细胞分裂情况为指标,经过复筛,获得22个具有稳定表型的突变体家系。根据表型相似性将候选家系分为6组。将候选家系进行组内杂交,根据F1代植株表型是否与亲本相似,获得两对等位突变体。