免埋土酿酒葡萄‘北玺’、‘北香’和‘北馨’植株主要病毒检测及脱毒技术研究

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本研究以宁夏贺兰山东麓6年生的免埋土的3个红色酿酒葡萄品种为研究对象,采用荧光定量PCR技术对3个品种植株的新梢、嫩叶、老叶、叶柄、枝蔓、根等部位进行病毒监测,探究适合‘北玺’、‘北香’、‘北馨’三个品种的组培快繁体系,并筛选适宜的脱毒处理方法,主要研究结果如下:1.检测了 12种常见病毒在‘北玺’、‘北香’、‘北馨’三个品种不同部位的病毒感染情况,三个品种共检测出10种病毒,其中‘北香’中检测出的病毒种类最多,有9种,分别为葡萄卷叶伴随2型病毒(GLRaV-2)、葡萄卷叶伴随3型病毒(GLRaV-3)、葡萄卷叶伴随4型病毒(GLRaV-4)、葡萄卷叶伴随7型病毒(GLRaV-7)、葡萄斑点病毒(GFKV)、葡萄病毒A(GVA)、葡萄病毒B(GVB)、葡萄病毒E(GVE)、葡萄蚕豆萎蔫病毒(GFabV)叶片中的病毒种类多。‘北馨’中检测出8种,分别为葡萄卷叶伴随3型病毒(GLRaV-3)、葡萄病毒B(GVB)、葡萄病毒A(GVA)、葡萄卷叶伴随4型病毒(GLRaV-4)、葡萄蚕豆萎蔫病毒(GFabV)、葡萄病毒(GVE)、灰比诺病毒(GPGV)、葡萄斑点病毒(GFKV),新梢和根中的病毒种类多。‘北玺’中检测出了 4种,葡萄病毒B(GVB)、葡萄卷叶伴随7型病毒(GLRaV-7)、葡萄卷叶伴随4型病毒(GLRaV-4)、葡萄斑点病毒(GFKV),病毒主要分布在新梢中。2.以田间采取的‘北玺’、‘北香’、‘北馨’的夏芽茎段作为初始外植体,对不同品种茎段的消毒方法、初始培养基、茎尖培养基、生根培养基等关键步骤进行了研究。结果表明:‘北馨’、‘北玺’最适宜的消毒方式为70%乙醇50(s)+15%H2O2 6 min,‘北香’最佳的消毒方式为70%乙醇50(s)+15%H202 5min,三个品种的最佳初始培养基为MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA,‘北馨’、‘北玺’的最佳茎尖培养基为 1/2MS+2mg/L6-BA+0.1mg/L,1/2MS+2mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,‘北香’的继代培养基为1/2MS+2mg/L6-BA+0.2mg/LNAA。三个品种筛选出的生根培养基均为 1/2MS+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA。3.以‘北玺’、‘北馨’、‘北香’的无菌组培苗为试材,用茎尖培养脱毒和茎尖结合药剂培养脱毒两种脱毒方法对无菌组培苗进行处理,研究表明‘北馨’、‘北香’的最佳脱毒方式为0.8 mm茎尖结合20mg/L病毒唑溶液,再生率分别为43.3%和57%,‘北馨’所检测病毒全部脱除脱毒率,‘北香’中GLRaV-7及GFKV未脱除。‘北玺’为0.8 mm茎尖结合10mg/L病毒唑溶液,再生率为66.66%,所检测病毒全部脱除脱毒率。
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