论文部分内容阅读
目的:体外分离培养兔脂肪干细胞并观察其生物学特性;探讨少剂量激素联合马血清建立兔激素性股骨头坏死动物模型的可行性研究;通过观察静脉移植脂肪干细胞能否在坏死股骨头动物模型体内存活、增值,以探讨脂肪干细胞在激素性股骨头坏死模型体内的示踪研究。方法:①.采用密度梯度离心法加贴壁培养法对兔脂肪组织进行了分离纯化,CD44免疫组化法分析ADSCs表面标志;用含成骨、成脂诱导培养基培养4周后,行碱性磷酸酶染色、Von kossa染色及油红“0”染色检查ADSCs是否向成骨、成脂细胞定向分化。②.长期少剂量肌注激素联合马血清建立兔激素性股骨头缺血坏死动物模型,分别于2周、4周、8周行X线影像学、HE染色病理学及电镜观察股骨头缺血坏死情况。③.将带有BrdU标记的ADSCs通过静脉移植于股骨头缺血坏死动物模型,移植后4周、8周行BrdU免疫组化检查,观察脂肪干细胞是否在模型体内存活、增值。结果:①.ADSCs体外分离培养增殖迅速,短时间内可扩增到组织工程需要的种子细胞数量;免疫组化检测ADSCs表面抗原CD44阳性,且细胞保持未分化状态;特殊诱导条件下可向成骨、成脂定向分化。②.通过X线、HE病理学和电镜观察证明成功建立激素性股骨头缺血坏死动物模型:③.BrdU体外细胞标记率达90%,且标记前后细胞活性无统计学差异;标记前后生长趋势亦无明显差异;移植后各时间点模型体内的髓腔、肝脏等组织内均可见到经BrdU标记的阳性细胞存在。结论:①.ADSCs可以作为组织工程的理想种子细胞;②.马血清联合少剂量长期应用激素能够建立兔激素性股骨头缺血坏死动物模型:③.BrdU标记法是一种良好的体内、外示踪方法;通过静脉移植于动物模型体内的ADSCs能够存活、增殖。