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随着高脂肪、高热量、久坐少动等不健康饮食和行为习惯的盛行,肥胖己成为种世界范围内日益严重的公共健康问题,肥胖可以引起许多代谢紊乱性疾病,如高脂血症、脂肪肝、高胰岛素血症、糖耐量异常等,成为高血压、2型糖尿病、心血管疾病、脑卒中等许多疾病的重要危险因素。目前,肥胖的发病率逐年增加,严重威胁着全球人类的健康。因此深入研究肥胖的发病机制,筛选防治肥胖的有效药物成为世界各国研究的热点。根皮苷是从野金柴中分离出来的一种黄酮类化合物,也是野金柴的主要成分。本课题组前期研究发现,根皮苷能够降低2型糖尿病大鼠的血糖、血脂及血清瘦素和胰岛素水平,由此我们推测其可能对改善肥胖症有一定的疗效,同时,笔者检索国内外文献,未发现有关其防治肥胖症的报道。因此,本课题旨观察根皮苷对肥胖小鼠和脂肪变性L02肝细胞的干预作用及初步探讨作用机制,为防治肥胖症提供实验参考。目的：本实验采用高脂饮食复制肥胖小鼠模型,以根皮苷进行干预,以辛伐他汀为阳性对照药,观察药物对肥胖小鼠体重、腹围、体长、饮食量、血糖、尿糖、血脂、葡萄糖耐量、胰岛素耐量、胰岛素水平等的影响,从整体动物方面观察根皮苷对肥胖小鼠糖脂代谢的作用效果；接着采用肝细胞脂肪变性模型,以根皮苷进行干预,观察药物对细胞内脂滴变化,培养液中甘油三酯、总胆固醇、葡萄糖含量等的影响,从肝脏这个主要的代谢组织的细胞层面上探讨根皮苷对脂肪肝的作用效果；进一步从分子水平上,考察根皮苷对肝脏组织中mTOR信号通路相关蛋白的表达水平,探讨根皮苷影响肥胖动物糖脂代谢的信号转导机制。方法：一、动物实验C57BL/6小鼠,雄性,4周龄,随机抽取12只小鼠为正常对照组,给予普通标准饲料喂养,其余小鼠给予高糖高脂饲料。喂养12周后,选取符合肥胖标准的小鼠,按照体质量均一的原则分为模型对照组,辛伐他汀(3.03mg/kg)组,根皮苷高、低剂量(80,40mg/kg)组,连续给药14周。实验期间,每周分别称量并记录一次体重和24小时摄食量和饮水量,每2周测定体长、腹围,给药后期测定餐后血糖、尿糖、测定葡萄糖耐量,胰岛素耐量。给药14周末,动物禁食12h,尾静脉取血一滴,血糖仪测定空腹血糖；然后眼眶取血,分离血清,酶标仪检测血清总胆固醇、甘油三酯、高低密度脂蛋白胆固醇水平,血清游离脂肪酸水平；ELISA法测定胰岛素。处死小鼠后,取出小鼠各脏器、棕色脂肪、腹部脂肪组织,称量并记录其湿重,同时计算各脏器、棕色脂肪、腹部脂肪组织系数,并对小鼠肝脏、胰腺和棕色脂肪用10%甲醛固定进行病理切片观察,并且对部分脏器用-80℃冰箱保存,以便以后实验需要。二、细胞实验(一)MTT法测定根皮苷对正常肝细胞的毒性试验,根皮苷浓度分组为3.9、7.8、15.6、31.3、62.5、125、250、500、1000μmol·L-1,并设对照组,分别于药物作用24h、48h、72h后,进行MTT试验。(二)采用不同浓度油酸诱导L02肝细胞三个时间段(24h、48h、72h),建立肝细胞脂肪变性的模型。油红O染色观察肝细胞内脂滴的变化,酶标仪检测细胞内TG含量及上清液TC、葡萄糖含量水平。观察不同时间段肝细胞脂变模型的情况。(三)根据不同时间段(24h、48h、72h)分别设立正常组,模型组,阳性药组和药物预防组,各时段每组各设置8孔,正常组加入含10%的胎牛血清RPMI-1640培养基继续培养,模型组加入含油酸的RPMI-1640培养基造模,阳性药组加入含有油酸并含有阳性药的RPMI-1640培养基,药物预防组加入含有油酸并含有不同浓度根皮苷的RPMI-1640培养基,观察药物对细胞脂变的预防作用。(四)采用油酸诱导L02肝细胞建立肝细胞脂肪变性模型,随后将其分为模型组、阳性药组(10μmol/L)、根皮苷低浓度组(200μmol/L)、根皮苷中浓度组(200μmol/L),根皮苷高浓度组(800μmol/L),并设正常组。分别于药物作用24h、48h、72h后,酶标仪检测肝细胞内TG,葡萄糖含量,油红O染色观察肝细胞内脂滴变化情况。三、作用机制的初步研究采用Western blot法检测肝脏组织中mTOR信号通路相关蛋白的表达和其磷酸化水平。结果：一、动物实验研究结果高脂饲料能使模型组小鼠体重、腹围、肥胖指数、血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白水平均升高。根皮苷能够降低小鼠体重、缩减腹围、抑制餐后血糖升高,降低总胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸、胰岛素水平,升高高密度脂蛋白水平,保护胰腺细胞的功能,降低脂肪肝的严重程度。二、细胞实验研究结果油酸能够使正常人肝细胞L02发生脂肪变性,油红O值、TG水平都升高；而根皮苷能够降低脂肪变性细胞的油红0值、TG水平、葡萄糖水平。作用机制的初步研究结果三、作用机制的初步研究结果根皮苷能够上调肥胖小鼠肝脏组织的GβL、Raptor蛋白水平表达,下调mTOR及其磷酸化蛋白水平表达。结论：根皮苷能够降低肥胖小鼠体重,改善血糖、血脂；也能够抑制肝细胞的脂质堆积,减少肝细胞中脂肪的生成和分化；上调Raptor蛋白水平表达和下调mTOR及其磷酸化蛋白水平表达,故根皮苷可能通过调节mTOR信号通路,从而起到纠正肥胖小鼠糖脂代谢紊乱的作用。