【摘 要】
：
目的:1.探讨Toll样受体4（TLR4）介导脂毒性引起胰岛β细胞功能损伤与跨膜蛋白24（TMEM24）的关系。2.研究TLR4调节TMEM24与PIP2/IP3通路的关系。方法:1.脂毒性损害βTC6细胞与TLR4、TMEM24的相关性:以小鼠胰岛素瘤细胞系βTC6细胞为研究对象,通过1.0mmol/L棕榈酸（PA）干预βTC6细胞24小时,建立β细胞的脂毒性模型,观察TLR4抑制剂（CLI09
论文部分内容阅读
目的:1.探讨Toll样受体4（TLR4）介导脂毒性引起胰岛β细胞功能损伤与跨膜蛋白24（TMEM24）的关系。2.研究TLR4调节TMEM24与PIP2/IP3通路的关系。方法:1.脂毒性损害βTC6细胞与TLR4、TMEM24的相关性:以小鼠胰岛素瘤细胞系βTC6细胞为研究对象,通过1.0mmol/L棕榈酸（PA）干预βTC6细胞24小时,建立β细胞的脂毒性模型,观察TLR4抑制剂（CLI095,1ug/ml）对脂毒性β细胞TMEM24表达的作用;设置TLR4激动剂（LPS,1ug/ml）干预β细胞作为阳性对照。实验分组:NC组、PA组、LPS组、DMSO组、CLI095组、CLI095+PA组,分别干预24小时,应用联免疫吸附（ELISA）法检测β细胞的基础胰岛素分泌（BIS）和葡萄糖刺激后的胰岛素分泌（GSIS）情况,流式细胞分析仪检测β细胞凋亡,应用Western Blot检测TLR4、TMEM24蛋白的表达。2.沉默TLR4对脂毒性调节TMEM24-PIP2-IP3的影响:应用TLR4 RNAi慢病毒载体（TLR4-si RNA）转染βTC6细胞以下调TLR4基因表达,建立脂毒性β细胞模型,观察下调TLR4表达对脂毒性β细胞TMEM24-PIP2-IP3的作用。实验分组:NC组、PA组、TLR4敲减组、TLR4敲减+PA组,分别干预24小时后,同上述方法检测β细胞的BIS和GSIS,β细胞凋亡,TLR4、TMEM24蛋白及其上游激酶PKC,下游PIP2蛋白表达;ELISA检测细胞内IP3水平。3.过表达TMEM24对TLR4介导的βTC6细胞脂毒性损害的Rescue作用:应用TMEM24过表达慢病毒载体转染βTC6细胞以上调TMEM24基因表达,建立脂毒性β细胞模型或LPS损害的β细胞,观察上调表达TMEM24对β细胞脂毒性损害及LPS损害作用的影响。实验分组:NC组、TMEM24过表达组、PA组、PA+MEM24过表达组、LPS组、LPS+TMEM24过表达组。同上述方法检测β细胞的BIS和GSIS,β细胞凋亡,TLR4、TMEM24、PKC和PIP2蛋白的表达;以及细胞内IP3水平。4.初步探讨βTC6细胞内TLR4与TMEM24蛋白的相互作用方式:观察脂毒性β细胞模型或LPS损害的β细胞TLR4与TMEM24蛋白的定位及互作的变化,并观察抑制TLR4活性对脂毒性β细胞TLR4与TMEM24蛋白定位及互作的影响。实验分组:NC组、PA组、LPS组、CLI095组,CLI095+PA组分别干预24小时后,应用激光共聚焦、免疫共沉淀（CO-IP）观察TLR4和TMEM24的定位及是否存在直接相互作用的可能。结果:1.PA干预βTC6细胞可诱导TLR4表达上调,并抑制TMEM24表达,减少β细胞BIS及GSIS分泌,增加β细胞凋亡;特异性抑制TLR4活性,可削弱PA上述的脂毒性作用;而特异性激活TLR4,亦可下调β细胞TMEM24表达,抑制胰岛素分泌减少,促进β细胞凋亡。2.沉默β细胞TLR4表达可拮抗脂毒性导致的TMEM24表达下调,同时上调PIP2表达,增加细胞内IP3水平,并抑制PKC磷酸化,增加胰岛素分泌,减少β细胞凋亡。而特异激动TLR4,可导致TMEM24及其下游PIP2表达下调,降低细胞内IP3水平,并上调PKC的磷酸化水平。3.诱导β细胞过表达TMEM24可削弱脂毒性作用,表现为上调PIP2表达,增加细胞内IP3水平,并抑制PKC磷酸化,增加胰岛素分泌,减少β细胞凋亡。同样,过表达TMEM24亦可拮抗LPS对β细胞损害作用。4.运用激光共聚焦显微镜观察到TLR4和TMEM24共定位于细胞质,免疫共沉淀提示TLR4与TMEM24可能存在相互作用。结论:1.PA促进β细胞凋亡、促进胰岛素分泌障碍,同时抑制TMEM24表达;2.TLR4直接抑制TMEM24表达介导β细胞脂毒性损伤;3.TLR4抑制TMEM24表达介导β细胞脂毒性损伤可能通过下调其下游信号PIP2-IP3起作用。
其他文献
研究目的1、对国内外已发表的绝经后骨质疏松症（Postmenopausal Osteoporosis,PMOP）循证临床实践指南进行方法学质量评价,为PMOP治疗用药选择提供参考,明确药物经济学评价的参比方案,并促进我国临床实践指南质量的提高。2、系统评价我国PMOP药物经济学评价研究的方法学质量,明确不同抗骨质疏松症药物的经济学特性及我国PMOP药物经济学评价的研究现状,确定进一步研究的方向。3
目的分析睡眠特征与患2型糖尿病的之间的暴露反应关系;筛选及验证病例组与对照组外周血白细胞中差异表达的lncRNA,评估其对2型糖尿病的诊断价值;构建2型糖尿病表观遗传风险得分,分析表观遗传风险得分与睡眠因素对2型糖尿病的影响及其之间的潜在的交互作用,为进一步探索2型糖尿病的危险因素和表观遗传机制提供科学依据。方法（1）采用医院为基础的病例-对照研究设计,于2018年12月至2020年02月,在福建
目的:本研究旨在分析2型糖尿病（T2DM）患者的体成分及其构成比变化与骨密度（BMD）的相关性。方法:纳入随访研究的T2DM患者共544名,包括男性患者274名,女性患者270名,中位随访时间2.33年。将研究对象分为体重指数（BMI）增加组、BMI稳定组、BMI减少组,调整年龄、T2DM病程、T2DM慢性并发症、血糖、血脂、血压、用药史等混杂因素,使用线性回归及二元logistic分析BMI、全
目前,变速恒频发电机的主流机型有两种,包括有刷双馈电机和永磁同步发电机。有刷双馈电机所需变频器容量小,功率因数可调,但电机本身有电刷和滑环结构,可靠性低,维护成本高;永磁同步电机所需变频器容量大,系统总成本高。相比于前两者,无刷双馈电机省去了电刷和滑环,提高了可靠性、降低了维护成本,且所需变频器容量小,系统总成本低。由于这些优点,使得无刷双馈电机在风力发电领域有广泛的应用前景。近年来,国内外诸多学
2020年新冠疫情的全面爆发和全球蔓延,给世界经济的运行带来了极大的冲击,各国为了应对疫情的负向影响纷纷实施量化宽松的货币政策。充足过量的金融资源在提振经济的同时,扰乱了资源配置的已有格局,对提升资源配置效率提出了更高的要求。加之,世界经济增速下降、单边主义抬头、地缘政治摩擦不断等问题凸显,全球社会、经济和政治秩序变得更加复杂和动荡。因此,研究资源的优化配置问题对于我国经济高质量发展至关重要。在中
目的:妊娠期糖尿病（Gestational diabetes mellitus,GDM）妇女其子代患超重、肥胖等疾病风险较高,母乳喂养是降低这些疾病风险的重要举措。本研究通过收集、分析和比较患有GDM和正常妊娠妇女产后不同泌乳阶段母乳宏量营养素、小分子代谢物及微生物多样性差异,旨在探明妊娠期糖尿病对不同泌乳阶段母乳宏量营养素、小分子代谢物及微生物多样性可能存在的影响,为指导合理母乳喂养提供理论依据
目的:双侧前循环脑动脉瘤在临床上并不少见,目前其手术方式尚未形成统一的认识,本文通过回顾性研究对单侧锁孔入路夹闭前循环脑动脉瘤的可行性、安全性、有效性进行分析,以期望对这一术式进行临床总结。方法:回顾性研究本中心45例双侧前循环脑动脉瘤的手术病例:1.收集患者一般信息及术前影像学资料,测量入路对侧的动脉瘤位置、朝向、大小及瘤颈与骨窗的距离等,统计各因素对于动脉瘤暴露程度的影响,对该术式的可行性进行
目的探讨不同剂量右美托咪啶硬膜外推注作为负荷用药对罗哌卡因复合舒芬太尼硬膜外分娩镇痛效果的影响。方法严格采取统一标准,选择我院120例足月、单胎、首次分娩的分娩产妇,采用随机数字表法将全部患者随机分为四组,每组各30例,所有患者的背景用药均为0.08%罗哌卡因+0.3ug/ml舒芬太尼（以下简称基础药液）,负荷用药为:D1组:硬膜外推注生理盐水5ml（含右美托咪啶0.06ug/kg）+基础药液12
目的:结合问卷调查与实验室检测,分析PAEs暴露与EMT发生的相关性;初步探讨PAEs致EMT的潜在作用机制。方法:1.以问卷调查形式,通过病例对照回顾性研究,选取2019年1月-2021年05月福州市妇幼保健院及福建省妇幼保健院妇产科就诊的100例经腹腔镜检查及术后病理证实为EMT患者作为病例组,选取同期福州市妇幼保健院妇产科就诊的100例经腹腔镜检查及术后病理证实为非EMT女性作为对照组,通过