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目的研究重组人胰高血糖素样肽-1(Recombinant human glucagon-like peptide-1,rhGLP-1)减轻糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)干扰的人牙周膜干细胞(Human periodontal ligment stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力损伤,并对作用机制及相关信号通路进行探讨。方法(1)培养hPDLSCs,检测造血干细胞表面标志物CK19和CD34的表达及间充质干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105和Vimentin的表达,并进行成骨诱导分化。(2)使用 CCK-8(Cell counting kit-8)检测 AGEs 对 hPDLSCs 增殖作用;分析不同浓度AGEs诱导hPDLSCs成骨分化,并进行ALP定量分析、ELISA检测Col-I表达、Realtime PCR 和 Western blot 检测 AGEs 诱导后 BSP、Runx2 和 OPN的表达。(3)使用CCK-8检测rhGLP-1对hPDLSCs增殖作用,并进行ALP定量分析,ELISA 检测 rhGLP-1 干预后 Col-Ⅰ 的表达,Realtime PCR、Western blot 和免疫荧光染色检测rhGLP-1干预后BSP、Runx2和OPN的表达,同时检测PKA信号通路和PKC信号通路的关键蛋白RAGE、PKA、pPKA、PKCβ1/2、pPKCβ1/2的表达。(4)使用PKC抑制剂、激动剂干预,进行ALP定量分析,Realtime PCR、Western blot和免疫荧光染色检测干预后BSP、Runx2和OPN的表达;Realtime PCR检测PKC、PKA信号通路相关基因表达,同时使用Western blot和免疫荧光染色检测关键蛋白 RAGE、PKA、pPKA、PKCβ1/2、pPKCβ1/2 的表达。结果(1)培养hPDLSCs,成骨诱导成功,间充质干细胞表面标志物CD90阳性(98.80%±1.16%)、Vimentin 阳性(98.96%±0.89%)、CD73 阳性(95.10%±2.81%)、CD105阳性(91.70%±3.50%),造血干细胞表面标志物CK19阴性(3.51%±1.92%)、CD34 阴性(6.83%±1.57%)。(2)AGEs可抑制hPDLSCs增殖能力,且呈浓度-时间依赖性。AGEs能够明显抑制hPDLSCs的成骨分化,主要表现为ALP、Col-I、BSP、Runx2和OPN的表达水平在细胞成骨诱导7d后明显低于单纯诱导组(p<0.05),随着AGEs浓度的增高,成骨相关基因及蛋白表达水平逐渐降低,呈浓度依赖性。(3)在加入10-8M rhGLP-1后,rhGLP-1能够减轻AGEs造成的hPDLSCs的成骨分化能力下降,提高ALP、Col-I、BSP、Runx2和OPN成骨相关基因及蛋白的表达,增加矿化沉积(p<0.05),结果显示rhGLP-1增强hPDLSCs的成骨分化能力。(4)使用AGEs干预,hPDLSCs中RAGE表达增加,PKCβ2磷酸化水平升高,PKA磷酸化水平降低(p<0.05);相反,rhGLP-1干预后,hPDLSCs中PKA磷酸化水平升高,RAGE表达降低,PKCβ2磷酸化水平降低(p<0.05)。(5)PKC抑制剂可模拟rhGLP-1的作用,PKC激动剂可降低rhGLP-1的作用,提示rhGLP-1可能通过影响PKC和PKA通路改善AGEs诱导的hPDLSCs成骨分化。结论(1)AGEs可抑制hPDLSCs增殖及成骨分化,降低hPDLSCs中成骨相关因子ALP、Col-I、BSP、Runx2 和 OPN 表达。(2)AGEs可能通过提高PKC-β2磷酸化水平,抑制hPDLSCs成骨分化。(3)rhGLP-1能够促进hPDLSCs成骨分化,提高hPDLSCs中成骨相关因子ALP、Col-I、BSP、Runx2 和 OPN 表达。(4)rhGLP-1能够减轻AGEs造成的hPDLSCs成骨分化能力下降,其机制与rhGLP-1抑制PKCβ2磷酸化,激活PKA信号通路有关。