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副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)为革兰氏阴性的短杆菌,常存在鱼类和贝类等海产品中,分布于海岸线等世界各地.在沿海地区和国家,该菌为首要的病原引起食物中毒之一.此菌主要通过消化道感染,患者出现腹泻、腹部痉挛、恶心、呕吐、发热,甚至脱水、昏迷等症状,副溶血弧菌引起的食物中毒多发生在夏季节.流行病学调查结果表明,该病主要因误食含该病原菌污染或处理不当的海产品而引起.但由于该菌在海产品生产过程中可通过各种途径进入成品食品中,在多种海产品成品中存在,对消费者健康构成潜在威胁.因此,建立副溶血弧菌的快速简便的鉴定和分子分型方法,对于开展海产品生产加工过程中副溶血弧菌污染源调查和控制,提高食品的微生物卫生质量具有重要意义.以具有副溶血弧菌种特异性的不耐热溶血素基因(tl)和旋转酶B(gyrB)为靶目标,建立双重聚合酶链反应(PCR)方法以鉴别弧菌属中的副溶血弧菌.双重PCR方法检测Vp标准株,均有高度灵敏性和特异性.进行双重PCR检测,可出现2个条带,其中1条为gyrB基因的特征性条带(285 bp),另一条为tl基因片段(450 bp),对人工污染虾肉酱的6 h预增菌培养,副溶血弧菌的检测底限为2.5×10<0>~10<1>CFU/g.建立的双重PCR法可用于海产品中副溶血弧菌的特异性鉴定.我们用此方法检测了182份新鲜和冷冻海产品,对其中46个在选择性平板上疑似菌落进行了二重PCR和生化鉴定,有32株为副溶血弧菌,这些分离株中没有扩增出tdh基因.本研究还初步建立了用于追踪海产品加工过程中副溶血弧菌污染源和污染途径的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法,副溶血弧菌基因组DNA用ApaI进行酶切.结果表明:建立的PFGE方法将11株不同来源的分离株(包括标准株)分成A、B和C三个型,初步表明具有较好的分型性.总之,本试验所建立的双重PCR和PFGE分型方法为进一步开展海产品生产过程中副溶血弧菌的检测和污染源的追踪和监控提供了一定的技术基础.