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目的:通过体外实验研究浒苔多糖粗提物对巨噬细胞株RAW264.7增殖,分泌细胞因子IL-6、TNF-α水平等细胞活性的变化,验证其调节免疫作用;并从浒苔多糖粗提物引起RAW264.7中mTOR mRAN表达变化来探讨可能的活化分子机理,为研究开发浒苔多糖提供依据。方法:1.细胞的复苏培养、传代、冻存和实验前处理。2.检测不同剂量时间浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响:显微镜下观察细胞形态并成像;噻唑蓝(MTT)比色法检测增殖作用;3.酶联免疫法(ELISA)检测不同剂量/时间浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子IL-6、TNF-α水平的影响;4. Real Time PCR检测不同剂量/时间浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7mTOR基因表达相对定量变化的影响。结果:1.随干预剂量增加,镜下RAW264.7数量增多,体积变大细胞更多,分化愈明显;但随时间延长,RAW264.7数量减小,细胞体积变大。一定作用浓度下有随干预浓度增加相对细胞增殖率呈上升趋势;随时间延长各剂量组吸光度下降,其细胞增殖力减弱。2.浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7促进分泌细胞因子IL-6、TNF-α:在15.625-1000μg/mL范围内RAW264.7分泌IL-6作用呈剂量依赖性;低浓度范围(500μg/mL以下)RAW264.7分泌呈剂量依赖性,高浓度(1000μg/mL)RAW264.7分泌TNF-α作用减弱。3. mTOR基因表达:浒苔多糖粗提物对RAW264.7巨噬细胞mTOR基因表达明显促进作用,有一定的剂量依赖性。结论:1.浒苔多糖在一定作用浓度范围、时间内有促进巨噬细胞RAW264.7增殖,初步证实其具有促进巨噬细胞增殖的活性,细胞增殖具有剂量依赖性,无细胞毒性,促进巨噬细胞增殖可能是浒苔多糖发挥免疫调节作用的方式之一。2.浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子IL-6、TNF-α有促进作用;说明浒苔多糖有明显的免疫增强活性,进一步表明其有助于促进细胞介导免疫反应。3.巨噬细胞相对增殖率和细胞因子TNF-α与IL-6的分泌随巨噬细胞培养时间的延长而有增加趋势,但不同干预时间增加趋势略有不同。提示可能原因如下:①培养基消耗致营养缺乏导致巨噬细胞RAW264.7大量分泌细胞因子,②炎症细胞因子对巨噬细胞RAW264.7自噬作用。③浒苔多糖的作用。4.浒苔多糖粗提物促进巨噬细胞RAW264.7mTOR基因表达,与其促进巨噬细胞RAW264.7增殖和促进免疫活化有一致效应,提示P13K/AKT-PTEN-mTOR信号转导通路可能与巨噬细胞RAW264.7免疫调节有关联。