论文部分内容阅读
流行性感冒(流感)是危害人类健康的常见急性传染病，以其抗原变异频繁且幅度大而著称，因此流感病毒的实验室监测尤为重要。流感是第一个实行全球性监测的传染病，天津自2001年起被WHO纳入流感监测网点。 对天津市流感病毒进行流行病学初步研究，为防治流感提供分子生物学基础是本研究之目的。本研究自2001年至2003年在天津市各大医院采集流感样病人标本543份，经MDCK细胞和鸡胚分离培养病毒，得到A1(H1N1)毒株13份，A3(H3N2)毒株75份，B毒株99份，2001—2002年天津市流行优势株为A3(H3N2)(42／64)，2002—2003年流行优势株为B(90／123)，两年间发生了流感病毒优势流行株型的改变。 继而，我们对所发现的A3(H3N2)亚型“O”相毒株进行分子生物学的初步研究，提取病毒液中的RNA，设计引物进行RT-PCR扩增HA1基因全序列，将扩增产物克隆于PMD-18T vector或pGEM-T easy vector，构建重组质粒。对其进行序列分析显示，在受体结合部位后壁第183位氨基酸位点上“O”相毒株为组氨酸(H)，而“D”相为亮氨酸(L)。未发现国外文献报道的194位，226位氨基酸的改变。在相应的乙型流感病毒“O”相变异的研究中，发现了197位上增加了糖基化位点，符合国外报道。这一结果表明，流感病毒的相变异机制复杂，它可能与HA蛋白的高级结构改变和细胞表面病毒受体的变化密切相关，有待进一步研究。 为了明确2002-2003年天津市B型流感病毒抗原变异的机制，我们选择分离出的有代表性的8株毒株(1株为Yagamata系，其余为Victoria系)，提取病毒液RNA，利用逆转录聚合酶链反应一单链构象多态性(RT-PCR一SSCP)对乙型流感病毒易发生变异的HAI部分3 08bP基因片段进行突变筛选，根据电泳谱图形不同将其分为4类，每类中各选一株PCR产物直接测序，将所扩增的片段与国际流行株B/Hongkong/330/2001(Vietoria系)比较，B/天津/02/145类毒株B/天津/02/221类毒株，B/天津/02/222类毒株，核昔酸序列同源性分别为:96.4%，96.4%，99.0%，与B/siehuan/379/99(Yagamata系)比较，B/天津/02门21类毒株核昔酸序列同源性为93.1%。在易变异区比较，同源性仍能达到90%以上，结果表明，天津市B型流感病毒抗原变异幅度不大，属于抗原漂移，应密切关注其变化趋势。与此同时，本研究显示了SSCP作为良好的流感病毒流行株筛选方法的可行性，值得在今后的工作中采纳和进一步研究。