【摘 要】
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为了更好地进行木瓜凝乳蛋白酶的检测和分离纯化,该课题进行了该酶多克隆抗体和单克隆抗体的制备研究.用Sigma公司的木瓜凝乳蛋白酶免疫新西兰大耳兔,经检测达到理想效价后,
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为了更好地进行木瓜凝乳蛋白酶的检测和分离纯化,该课题进行了该酶多克隆抗体和单克隆抗体的制备研究.用Sigma公司的木瓜凝乳蛋白酶免疫新西兰大耳兔,经检测达到理想效价后,收集血液,分离抗血清.采用免疫双扩散法对抗血清的特异性进行分析,结果表明,抗血清中除了含有木瓜凝乳蛋白酶的抗体外,还含有少量木瓜蛋白的抗体.先将抗血清用木瓜蛋白酶中和,再用免疫双扩散和免疫印迹法进行特异性分析,结果表明,中和后的抗血清不再含有木瓜蛋白酶的抗体,是木瓜凝乳蛋白酶的特异性抗血清,ELISA法测得其效价为10<-5>.特异性抗血清能检测重组木瓜凝乳蛋白酶.抗血清与抗原的免疫双扩散实验已表明购自Sigma公司的木瓜凝乳蛋白酶并非纯酶.为了制备特异性单克隆抗体,需分离高纯度的木瓜凝乳蛋白酶.在进行木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化前,该课题先进行了层析介质和洗脱缓冲液的选择.通过洗脱效果的比较,选择Macro-Prep High S Support作层析介质,pH5.0的醋酸钠缓冲液作洗脱缓冲液.
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