【摘 要】
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研究背景与研究目的骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是儿童中最常见的原发恶性骨肿瘤,在全世界每年的发病率约为1-3/100万,占所有恶性肿瘤的百分之零点二,占原发性骨恶性肿瘤的百分之十五。新的辅助化学治疗及联合外科手术,仍为目前治疗骨肉瘤的标准方法,对于早期发现、未见转移的患者,该方案治疗后五年生存期可达到65%左右,而对于复发或转移病例其5年生存率仍在20%以下。了解骨肉瘤恶性生物学行为的
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研究背景与研究目的骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是儿童中最常见的原发恶性骨肿瘤,在全世界每年的发病率约为1-3/100万,占所有恶性肿瘤的百分之零点二,占原发性骨恶性肿瘤的百分之十五。新的辅助化学治疗及联合外科手术,仍为目前治疗骨肉瘤的标准方法,对于早期发现、未见转移的患者,该方案治疗后五年生存期可达到65%左右,而对于复发或转移病例其5年生存率仍在20%以下。了解骨肉瘤恶性生物学行为的分子机制是探索治疗方法的前提条件,因此,关于骨肉瘤恶性生物学行为分子机制的研究已成为骨肉瘤相关研究的热点。据研究报道,BARX1在多种恶性肿瘤组织中高表达,通过促进肿瘤细胞的生长、迁移等恶性生物学行为起到促癌作用。TCGA数据库分析发现BARX1与骨肉瘤患者生存期呈负相关性,可能对骨肉瘤的恶性行为起促进作用,而且目前尚无BARX1与骨肉瘤的相关报道。基于上述背景,本研究拟深入探索BARX1在骨肉瘤中的生物学作用,为骨肉瘤的基础研究提供新的分子生物学理论。研究方法利用TCGA数据库,研究BARX1与骨肉瘤病人预后的相关性;免疫荧光、qPCR、Western blot等测定BARX1在骨肉瘤肿瘤与瘤旁组织中的表达差异;Western blot测定BARX1在不同骨肉瘤细胞系中的表达;用CCK8、Transwell测定过表达和敲减BARX1对骨肉瘤细胞系增殖、侵袭的作用;转录组测序筛选出BARX1潜在的靶基因并用qPCR验证;Western blot检测骨肉瘤细胞系过表达BARX1后与靶分子（HSPA6）的共表达情况;JASPAR数据库预测BARX1与HSPA6启动子的结合位点,双荧光素酶报告实验结合点突变验证BARX1与HSPA6的结合;免疫荧光检测骨肉瘤组织中BARX1和HSPA6的共表达情况;CCK8、Transwell检测敲减HSPA6对BARX1调控骨肉瘤细胞系增殖、侵袭等恶性生物学行为的影响。结果1、BARX1的表达与骨肉瘤患者预后不良有关,TCGA数据库结果表明在所有骨肉瘤病人中,BARX1高表达组较BARX1低表达组总生存率低,且中位生存期大幅减少。2、收集临床骨肉瘤样本,免疫荧光、qPCR及western blot结果显示BARX1在骨肉瘤样本中高表达。3、BARX1在骨肉瘤细胞系中普遍高表达,过表达BARX1促进骨肉瘤细胞的生长和侵袭,与敲减BARX1作用相反,细胞的生长和侵袭能力下降。4、在HOS细胞中过表达BARX1进行转录组测序,结果发现过表达BARX1后HSPA6表达显著增多,且HSPA6的蛋白水平随着BARX1表达的升高而增多。5、双荧光素酶报告实验结果显示BARX1可以直接结合HSPA6启动子发挥转录调控作用。6、荧光共标检测骨肉瘤组织中BARX1-HSPA6的共表达情况,结果发现BARX1与HSPA6的表达呈正相关BARX1高表达的细胞中HSPA6也高表达,BARX1低表达的细胞HSPA6表达亦不显著。7、敲减HSPA6取消了BARX1的促骨肉瘤细胞增殖、侵袭作用。结论1、BARX1在骨肉瘤中表达上调并促进骨肉瘤细胞恶性生物学行为;2、BARX1通过结合HSPA6启动子调控其转录介导骨肉瘤恶性生物学行为
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