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植物内生真菌是生活在健康宿主植物体内的真菌，它的存在对其宿主植物的生态适用性具有重要的影响，内生真菌的次生代谢产物也是开发医药和农药的重要来源之一。鉴于此，本文以南京市常见的24种常绿植物为材料，系统研究了内生真菌在这些植物中的分布及其对植物病原真菌生长的抑制活性，并对部分活性菌株的代谢产物进行了分析，为开发新型生物杀菌剂或杀菌剂先导化合物以及深入认识内生真菌与宿主之间的相互作用关系奠定了基础和理论参考依据。主要结果如下：
1.内生真菌的分布：采用标准内生真菌分离方法，从24种常绿植物的960个茎叶组织中共分离获得266株内生真菌，经形态观察与显微鉴定，将其归纳为19个属23个种，依次为链格孢(Alternaria sp.)、花核菌(Anthina sp.)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、蓖麻葡萄孢(Botrytis ricini)、粉红头孢霉(Cephalosporiumroseum)、盘长孢状刺盘孢(Colletotrichum gloeosporioides)、刺盘孢(Colletotrichum sp.)、鬼伞菌(Coprinellus sp.)、茎叶核菌(Ectostroma sp.)、多隔镰刀菌(Fusarium decemcellulare)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporium)、梨孢镰刀菌(Fusarium poae)、茄病镰刀菌(Fusarium solani)、白地霉(Geotrichumalbium)、禾谷刚毛菌(Lacellina graminicola)、盘二孢(Marssonia sp.)、盘单毛孢(Monochaetia monochaeta)、白青霉(Penicillium albicans)、组丝核菌(Phacodium sp.)、丝核菌(Rhizoctonia sp.)、小核菌属(Scterotium sp.)、万年青丛刺盘孢(Vermicularia montemartinii)和Paraconiothyrium brasiliense。它们在常绿植物中的分布具有以下四个特点：
①在常绿植物中普遍存在，每种植物至少含有一种内生真菌。
②存在一定的宿主专化性，其中黄曲霉、蓖麻葡萄孢、盘长孢状刺盘孢、多隔镰刀菌、白地霉、禾谷刚毛菌、白青霉及丝核菌8株真菌分别仅在侧柏、广玉兰、阔叶十大功劳、小叶黄杨、蚊母树、青冈、麦冬和枇杷中发现。
③在常绿植物中的分布存在一定的器官偏好性，其中枝条组织中的内生真菌数量约为叶片的12倍。
④分布具有广泛性，如花核菌，在所研究的8种常绿植物中都有花核菌的分布。
2.内生真菌的抗菌活性：采用菌丝块法筛选了48株内生真菌对植物病源菌：立枯丝核菌(Rizoctonia solani)、小麦链隔孢菌(Alternaria alternate)、大豆炭疽病菌(Glomerella glycines)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的拮抗活性、发酵液及其乙酸乙酯粗提取物的抗菌活性。结果表明10株(20.8％)内生真菌对至少1种植物病原菌具有拮抗活性；26株(54.2％)内生真菌的发酵液和27株(56.7％)发酵液的乙酸乙酯粗提物对植物病原菌有抑制作用，其中内生真菌茎叶核菌LT144、多隔镰刀菌LT183和刺盘孢LT198代谢产物的乙酸乙酯粗提物(浓度：2mg/mL)对6种供试植物病原菌生长的抑制活性均高于80％。
3.内生真菌的其它生物活性：对48株内生真菌产生降解酶的活性筛选发现，有3株内生真菌具有淀粉酶活性，分别为盘二孢LT181、白地霉LT274和茄病镰刀菌LT293；内生真菌鬼伞菌LT201和盘单毛孢LT210具有纤维素酶活性；21株具有酯酶活性；内生真菌白地霉LT274具有Orange G降解酶活性。此外，分离自夹竹桃的梨孢镰刀菌菌株LT174和分离自樟树的菌株LT254代谢产物对绿豆和小麦种子显示明显的植物毒活性。
4.菌株LT161的鉴定及其抗菌活性研究：从常绿药用植物樟树的枝条中分离到编号为LT161的内生真菌，经过菌落形态观察、显微鉴定与核糖体DNA-ITS序列分析，鉴定为Paraconiothyrium brasiliense。该菌代谢产物的抗菌活性具有以下特点：
①具有显著的广谱性，其发酵液的乙酸乙酯粗提物(浓度：1mg/mL)对7种植物病源真菌和3种人类病原真菌生长都有很好的抑制活性。
②活性物质的抗菌机制表现为对病原真菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。
③在酸性、中性和弱碱性条件下相对稳定，强碱环境(pH>11)会破坏活性物质的抗菌活性；对温度耐受性好，80℃以内抗菌活性能够保持在80％以上；对EDTA非常敏感，0.1mol/L EDTA的存在会使抗菌活性下降50-60％。
④对植物病害有很好的防治效果。对水稻纹枯病、水稻镰刀根腐病及小麦链格孢叶枯病病害能起到稳定的防治作用(浓度：2mg/mL)，与阳性对照达科宁效果相当。
5.内生真菌代谢产物抗菌成分的研究：内生真菌LT161代谢产物经过分离，得到抗菌活性组分0.37g。活性组分经过HPLC和LC/MS分析，四个化合物峰正在鉴定，未发现已报道的抗真菌活性物质。此外，采用类似的方法，分析了内生真菌LT147、198和256代谢产物中的抗真菌活性成分，发现菌株LT147代谢产物中可能有邻苯二甲酸二丁酯和苯乙酸的存在；而菌株LT198的代谢产物中可能存在3-吲哚乙酸；菌株LT256的代谢产物中则含有2-辛-2’-Z-烯戊烯二酸，目前对于这四个化合物还在进行抗菌活性验证。推测内生真菌LT161、LT147、LT198和LT256代谢产物中可能存在新结构抗菌化合物，有待进一步研究。